CONTRIBUTION OF FIBROBALST GROWTH FACTORS AND MAP-KINASE PATHWAY IN CELL PROLIFERATION CONTROL IN THE ANNELIDALITTA VIRENS

Аннотация

Толық мәтін

Помимо выдающихся способностей к регенерации, эррантные аннелиды обладают ещё одним особенным свойством - они сохраняют способность к терминальному росту на протяжении всей своей жизни. Оба этих процесса обеспечиваются пролиферацией мультипотентных клеток, а также их дальнейшей дифференциров-кой. Для позвоночных животных показано, что молекулы факторов роста фибробластов (FGF), способны регулировать эти процессы, однако для аннелид, как и для других спиральных животных, организация и функции FGF-сигналинга остаются загадкой. Для исследования этого вопроса на регенерирующих животных нами были выбраны 2 ингибитора: SU5402, действующий на рецептор FGF, и U0126, влияющий на каскад MAP-киназ. После воздействия ингибиторами производилась инкубация животных в растворе EdU, который метит ядра в S-фазе, обработка антителами к фосфогистону H3, выявляющими клетки в митозе, и окраскаDAPI. Если инкубация в ингибиторах производилась на протяжении 7 дней, начиная с момента ампутации, наблюдалось полное угнетение пролиферации и, как следствие, отсутствие бластемы и регенерационной почки. При стандартном мечении EdU включение предшественника если и происходило, то не более чем в десятке клеток, в то время как в норме на этих сроках насчитывается порядка нескольких тысяч клеток в S-фазе. В экспериментальных образцах также не было отмечено митотических картин, что подтверждает ключевую роль FGF в активации клеточной пролиферации в ответ на повреждение. В случае инкубации в ингибиторах на более поздних стадиях (с 4 до 6 дней после ампутации, дпа) наблюдался менее выраженный эффект: отмечалось угнетение пролиферации, но без полного её подавления. При более длительном нахождении в ингибиторах (с 2 до 4 или 6 дпа) также не наблюдалось полного подавления клеточных делений, но было отмечено нарушение морфологии регенерационной почки, её нервной и мышечной систем. Применение различных концентраций SU5402 выявило, что ингибирование пролиферации и роста регенерата имеет дозозависимый и обратимый эффект. Таким образом, мы впервые показали для аннелид, что на самых ранних этапах регенерации именно FGF-сигналинг активирует вступление клеток в митоз, однако на более поздних стадиях он не играет столь значительной роли. Помимо этого, молекулы FGF могут участвовать в индукции клеточных источников регенерации и де-дифференцировке, что требует дальнейшего изучения.