CULTIVATION OF THREE-DIMENSIONAL CELL LIVER MODELS

Аннотация

Толық мәтін

Последние достижения в области трехмерной технологии культивирования клеток включают использование плюрипотентных стволовых клеток и взрослых стволовых клеток, которые культивируются in vitro для формирования самоорганизующихся систем. Органоиды - это самоорганизующиеся многоклеточные структуры, которые повторяют структуру, функции органов и могут использоваться для моделирования развития, поддержания и восстановления органов ex vivo. Модельные органоиды могут быть получены из дифференцированных клеток, которые обладают необходимыми функциональными свойствами. Нами были получены клеточные сфероиды из двух типов клеток: HepG2 (гепатома человека) и HUVEC (эндотелиальные клетки пупочной вены) в качестве модели печёночного органоида. Выявлено, что клетки гепатомы формировали плотный органоид, тогда как клетки эндотелия распределялись в его толще, имитируя кровеносные сосуды. Также были сформированы сфероиды из первичных гепатоцитов крысы. Оценка физиологического состояния клеток в их составе выявила наличие гипоксийного ядра, характерного для трёхмерных клеточных структур. В целом, получение физиологически полноценных сфероидов из первичных клеток печени, не способных к длительному культивированию в культуре, является важным для дальнейшего использования 3D культур в создании моделей патологических изменений печёночной ткани. На следующем этапе нами были выделены клетки печеночного протока (по протоколу компании STEMCELL Technologies), среди которых предположительно имеются стволовые клетки печени, в частности, перисинусоидальные клетки. Клеточные суспензии заключали в купол из белкового матрикса Matrigel, который создаёт необходимые физико-химические условия для формирования гепатоцеллюлярных органоидов. Полученные клеточные структуры были проанализированы с привлечением методов иммунофлуо-ресцентного окрашивания с последующей микроскопией. Выявлено, что часть клеток, формирующих полученные органоиды, позитивно окрашивались на десмин, что является одним из маркеров перисинусоидальных клеток. Далее мы планируем проведение дифференцировки клеток в составе органоидов для получения зрелых форм и моделирования начальных стадий фиброза.