Реферат

Адоптивный перенос T- и NK-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (CAR), рассматривают как перспективную стратегию борьбы с онкологическими заболеваниями. Химерные антигенные рецепторы представляют собой искусственные молекулы, которые обеспечивают активацию несущих их клеток при контакте с определенным антигеном для реализации функции киллинга. В отличие от Т-клеток, NKклетки не экспрессируют Т-клеточные рецепторы, что позволяет использовать их в аллогенном формате, не опасаясь реакции «трансплантат против хозяина». Целью данной работы было исследование антиметастатической активности дважды модифицированной человеческой NK-клеточной линии YT — клеток Cyto-CAR-YT-Lact, несущих CAR к белку PSMA и экспрессирующих проапоптотический белок лактаптин. Методом лентивирусной трансдукции была получена линия карциномы молочной железы BrCCh4e-134 с высокой экспрессией PSMA. В качестве эффекторных клеток была использована дважды модифицированная NK-клеточная линия человека YT — Cyto-CAR-YT-Lact, экспрессирующая функциональный CAR против PSMA и несущая делецию гена Shp-2, кодирующего белок Shp-2 — негативный регулятор активации NK-клеток. Цитотоксическую активность CytoCAR-YT-Lact-клеток in vitro оценивали на клеточной линии BrCCh4e-134 с гиперэкспрессией PSMA и на PSMAнегативной родительской клеточной линии BrCCh4e в режиме реального времени. Анализ антиметастатической активности Cyto-CAR-YT-Lact-клеток проводили на модели спонтанно метастазирующей и внутривенно трансплантированной PSMAпозитивной опухоли BrCCh4e-134 на мышах SCID и NOD/SCID. Клетки дважды модифицированной линии Cyto-CAR-YT-Lact эффективно уничтожали PSMA-позитивные опухолевые клеткимишени и с меньшей эффективностью PSMA-негативные клетки-мишени в экспериментах in vitro. В качестве опухолевой модели в работе использовали клетки рака молочной железы человека, гиперэкспрессирующие молекулы-мишени PSMA и характеризующиеся метастазированием в лимфоузлы средостения при трансплантации мышам. Было показано, что однократное внутривенное введение препарата клеток Cyto-CAR-YT-Lact супрессировало развитие метастазов на модели спонтанного метастазирования и при введении опухолевых клеток в кровоток. Ответ первичного опухолевого узла на терапию Cyto-CAR-YT-Lact-клетками не был обнаружен. Таким образом, применение модифицированных NKклеток можно рассматривать в качестве многообещающего терапевтического подхода для подавления метастазирования, но не для супрессии роста первичного опухолевого узла.

Ключевые слова: CAR-NK клетки, химерный антигенный рецептор, лактаптин, PSMA.

Car-dependent anti-metastatic activity of modified NK cell line YT

Adoptive T- and NK-cells transfer with chimeric antigenic receptors (CAR) is considered as a promising anticancer strategy. Chimeric antigenic receptors are artificial molecules that provide activation of the cells carrying them when they contact with a specific antigen to induce cell death. Unlike T cells, NK cells have no T-cell receptors, which prevent “graft-versus-host” disease under allograft transplantation. The aim of this work was to study antimetastatic activity of a double-modified human NK cell line YT — Cyto-CAR-YT-Lact cells carrying CAR to the PSMA protein and expressing antiapoptotic protein lactaptin. The BrCCh4e-134 breast carcinoma line with high PSMA expression was constructed by lentiviral transduction. The YT double modified NK cell line, Cyto-CAR-YT-Lact, expressing functional antiPSMA CAR and carrying a deletion of the Shp-2 gene encoding the Shp-2 protein, a negative regulator of NK cell activation, was used as effector cells. The cytotoxic activity of Cyto-CAR-YT-Lact cells was tested on PSMA-positive BrCCh4e-134 cells and on parental BrCCh4e cell in vitro in real-time mode. The antimetastasis activity of Cyto-CAR-YT-Lact cells was analyzed in SCID and NOD/SCID mice with spontaneously metastases and intravenously transplanted PSMA-positive BrCCh4e-134 cells. Cyto-CAR-YT-Lact cells efficiently reduced the viability of PSMA-positive tumor cells and moderately PSMA-negative target cells in vitro. As a tumor model, we used human breast cancer cells that overexpress PSMA as a transgene and are characterized by metastasis to the mediastinal lymph nodes being transplanted on mice. It was shown that a single intravenous administration of the Cyto-CAR-YT-Lact cells suppressed the development of metastases in the spontaneous metastasis model and when tumor cells were introduced into the bloodstream. The reaction of the primary tumor node to Cyto-CAR-YT-Lact therapy was not detected. Thus, the use of modified NK cells can be considered as a promising therapeutic approach for suppressing metastasis, but not for suppressing the growth of the primary tumor node.

Keywords: CAR-NK cells, chimeric antigene receptor, lactaptin, PSMA.