Авторы
И.Я. Бозо, М.О. Мавликеев, А.А.Титова, А.И. Билялов, Ф.А. Индейкин, А.В. Пулин, И.И. Еремин, В.С. Комлев, А.А. Исаев, Р.В. Деев
Реферат
Количество исследований в области ген-активированных материалов ежегодно увеличивается, первое изделие данного класса уже внедрено в клиническую практику для костной пластики. Учитывая специфический механизм действия ген-активированных материалов, обусловленный входящими в их состав генными конструкциями, актуализируется потребность в стандартизации методов исследований, которые позволяют охарактеризовать реализацию всех этапов биологического действия in vivo. В настоящей работе на примере ген-активированного гидрогеля, состоящего из коллагена I типа и плазмидной ДНК с геном сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF165), раз личными методами была подтверждена реализация механизма действия плазмидной ДНК. Для этого использована флуоресцентная метка Cy3, репортерная плазмидная ДНК с геном люциферазы светлячков (Luc), ПЦР-РВ и ИФА, иммуногистохимическое исследование с антителами к CD31. Результаты со поставлены с данными других научных работ, сформулированы рекомендации по составу минимально необходимого перечня исследований для разработки ген-активированных материалов.
Ключевые слова: ген-активированный материал, гидрогель, плазмидная ДНК, Cy3 метка, люцифераза, VEGF.
COMPLEX ASSESSMENT OF A PLASMID DNA MECHANISM OF ACTION IN DEVELOPMENT OF GENE‑ACTIVATED MATERIALS
The number of studies related with gene-activated matrices is increasing annually; the first-in-class product has been already implemented into clinical practice for bone grafting indications. Considering specificity of the gene-activated matrices mechanism of action determined by gene constructs, there is a demand to standardize the methods allowing to characterize all the stages of biological action in vivo. Here, using on the example of a gene-activated hydrogel consisting of type I collagen and plasmid DNA with the vascular endothelial growth factor gene (VEGF165), the main steps of the plasmid DNA mechanism of action were confirmed by various methods. For this, a fluorescent Cy3, reporter plasmid DNA with the firefly luciferase gene (Luc), RT-PCR and ELISA, immunohistochemical study with antibodies to CD31 were used. The results were compared with the other scientific papers, some recommendations were formulated to determine a minimally required list of studies for the development of gene-activated materials.
Keywords: gene-activated matrix, hydrogel, plasmid DNA, Cy3, luciferase, VEGF.
