Human fetal liver is unique as it contains stem hematopoietic cells and their committed derivatives of different maturation. The present study was aimed to assess the amount of immunocompetent human fetal hepatic cells of 9-10 week gestation by phenotypic properties and their reaction to mitogens as well as to evaluate influence of human fetal hepatic cells to proliferation of peripheral blood lymphocytes of adult donors in a mixed culture.
The suspension of human fetal hepatic cells was obtained by a mechanical method using vibration. Cells were cryoconserved under the protection of 5% DMSO at the speed of 1 °С per min. Fluorescent microscopy was used for immune marker analysis. The proliferation activity of fetal hepatic cells and adult peripheral blood lymphocytes was assessed according to 3H-thymidine inclusion. In the mixed culture human fetal hepatic cells were co-cultured with peripheral blood lymphocytes in the presence or absence of mitogens.
Immune marker analysis of the fetal hepatic cells suspension did not reveal the statistically relevant number of matured B- and T- lymphocytes. Unlike adult peripheral blood lymphocytes human hepatic cells demonstrated high levels of spontaneous proliferation when cultured in vitro. Mitogens, phytohemagglutinine (PHA) or concanavalin А (Con-А) suppressed the proliferation of human fetal hepatic cells. In the mixed culture the fetal hepatic cells suppressed both spontaneous and mitogen-stimulated proliferation of adult peripheral blood lymphocytes as well as peripheral lymphocyte proliferation in a twoforked mixed culture. Possible mechanisms of fetal hepatic cells activity have been discussed in the article.
Фетальная печень человека (ФПЧ] является уникальным органом, в котором содержатся стволовые кроветворные клетки и их коммитированные потомки различной степени зрелости. В настоящей работе проведено определение содержания иммунокомпетентных клеток в ФПЧ 9-10 недель гестации по фенотипическим свойствам и реакции на митогены, а также исследовано влияние клеток ФПЧ на пролиферацию лимфоцитов периферической крови взрослых доноров при совместном культивировании.
Суспензию клеток ФПЧ получали неферментативным методом с использованием вибрации. Клетки криоконсервировали под защитой 5% ДМСО со скоростью 1 °С/мин. Фенотипический анализ проводили с использованием флуоресцентной микроскопии. Пролиферативную активность клеточных культур ФПЧ и лимфоцитов периферической крови (ЛПК) взрослых доноров определяли по включению 3Н-тимидина. В смешанной культуре клетки ФПЧ совместно культивировались с ЛПК в присутствии или отсутствие митогенов.
Иммунофенотипический анализ суспензии клеток ФПЧ не выявил зрелых B- и T-лимфоцитов. Клетки ФПЧ, в отличие от ЛПК взрослых доноров обладали высоким уровнем спонтанной пролиферации в условиях культивирования in vitro. Митогены - фитогемагглютинин (ФГА) и конканавалин А (Кон-А) подавляли пролиферацию клеток ФПЧ. При совместном культивировании, клетки ФПЧ подавляли как спонтанную, так и митоген-стимулированную пролиферацию ЛПК взрослых доноров, а также пролиферацию ЛПК в двунаправленной смешанной культуре. В работе обсуждаются возможные механизмы действия клеток ФПЧ.