Genes & CellsGenes & CellsГены и КлеткиGenes and Cells2313-18292500-2562Human Stem Cells Institute12168710.23868/gc121687ArticlesСтатьиGeneration of recombinant adenoviruses and lentiviruses expressing angiogenic and neuroprotectivefactors using Gateway cloning technologyСоздание рекомбинантных аденовирусови лентивирусов, экспрессирующих ангиогенныеи нейропротекторные факторы, с помощьютехнологии клонирования GatewayCherenkovaE EЧеренковаЕ Е

Kazan (Volga region) Federal University, Kazan

Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань

FedotovaV YФедотоваВ Ю

Kazan (Volga region) Federal University, Kazan

Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань

BorisovM AБорисовМ А

Kazan State Medical University, Kazan

Казанский государственный медицинский университет, Казань

IslamovR RИсламовР Р

Kazan State Medical University, Kazan

Казанский государственный медицинский университет, Казань

RizvanovA AРизвановА А

Kazan (Volga region) Federal University, Kazan

Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань

Kazan (Volga region) Federal University, KazanКазанский (Приволжский) федеральный университет, КазаньKazan State Medical University, KazanКазанский государственный медицинский университет, Казань1509201273NO3 (2012)№3 (2012)16416811012023Copyright ©; 2012, Eco-VectorCopyright ©; 2012, Эко-Вектор2012Eco-VectorЭко-Векторhttps://genescells.ru/2313-1829/article/view/121687

The critical aspect in gene and gene-cell therapy is to find an optimal vector - a carrier of genetic information. Viruses represent a natural biological system for gene transfer into eukaryotic cells. One of the most effective and proven vectors for delivery of recombinant nucleic acids into mammalian cells are adenoviruses and lentiviruses. In this study using the Gateway cloning we have constructed adenoviral and lentiviral vectors encoding angiogenic and neuroprotective factors: various isoforms of vascular endothelial growth factor vegf121, vegf165, vegf189; basic fibroblast growth factor fgf2; glial cell-derived neurotrophic factor gdnf. The efficiency of transduction of HEK293A cell line with generated recombinant viruses and expression of recombinant proteins were confirmed by immunofluorescent analysis.

Важной задачей генной и генно-клеточной терапии является поиск оптимального вектора - переносчика генетической информации. Вирусы представляют собой естественную биологическую систему переноса генов в эукариотические клетки. Одними из наиболее эффективных и доступных векторов для доставки рекомбинантных нуклеиновых кислот в клетки являются адено- и лентивирусы. В настоящем исследовании с помощью системы Gatewayклонирования нами были сконструированы аденовирусные и лентивирусные векторы, кодирующие ангиогенные и нейропротекторные факторы: изоформы сосудистого эндотелиального фактора роста vegf121, vegf165, vegf189; основной фактор роста фибробластов fgf2; глиальный нейротрофический фактор gdnf. Эффективность трансдукции клеток линии НЕК293А полученными генетическими конструкциями и экспрессия рекомбинантных белков подтверждены методом иммунофлуоресцентного анализа.

adenoviruslentivirusGateway cloningvascular endothelial growth factorbasic fibroblast growth factorglial cell-derived neurotrophic factorаденовирусылентивирусыGateway- клонированиесосудистый эндотелиальный фактор ростаосновной фактор роста фибробластовглиальный нейротрофический факторLeker R.R., Shohami E. Cerebral ischemia and trauma-different etiologies yet similar mechanisms: neuroprotective opportunities. Brain Res. Brain Res. Rev. 2002; 39(1): 55-73.Abe K. Therapeutic potential of neurotrophic factors and neural stem cells against ischemic brain injury. J. Cereb. Blood Flow Metab. 2000; 20(10): 1393-408.Leker R.R., Soldner F., Velasco I. et al. Long-lasting regeneration after ischemia in the cerebral cortex. Stroke 2007; 38(1): 153-61.Beck K.D., Valverde J., Alexi T. et al. Mesencephalic dopaminergic neurons protected by GDNF from axotomy-induced degeneration in the adult brain. Nature 1995; 373(6512): 339-41.Tomac A., Lindqvist E., Lin L.F. et al. Protection and repair of the nigrostriatal dopaminergic system by GDNF in vivo. Nature 1995; 373(6512): 335-9.Dore-Duffy P., Wang X., Mehedi A. et al. Differential expression of capillary VEGF isoforms following traumatic brain injury. Neurol. Res. 2007; 29(4): 395-403.Lafuente J.V., Argandona E.G., Mitre B. VEGFR-2 expression in brain injury: its distribution related to brain-blood barrier markers. J. Neural. Transm. 2006; 113(4): 487-96.Papavassiliou E., Gogate N., Proescholdt M. et al. Vascular endothelial growth factor (vascular permeability factor) expression in injured rat brain. J. Neurosci. Res. 1997; 49(4): 451-60. 9. Sköld M.K., Gertten C. VEGF and VEGF receptor expression after experimental brain contusion in rat. Neurotrauma 2005; 22(3): 353-67.Vorburger S.A., Hunt K.K. Adenoviral gene therapy. Oncologist 2002; 7(1): 46-59.Yang X., Boehm J.S., Yang X. et al. A public genome-scale lentiviral expression library of human ORFs. Nat. Methods. 2011; 8(8): 659-61.