МГУ им. MB. Ломоносова, Москва
МГУ им. MB. Ломоносова, Москва
НИИ Общей патологии и патофизиологии РАМН, Москва
МГУ им. MB. Ломоносова, МоскваНИИ Общей патологии и патофизиологии РАМН, Москва
Lomonosov Moscow State University, Moscow
Lomonosov Moscow State University, Moscow
Institute of General Pathology and Pathophysiology, Moscow
Lomonosov Moscow State University, MoscowInstitute of General Pathology and Pathophysiology, Moscow
A lot of experimental data have been accumulated and numerous clinical trials have been conducted in the field of stem cell biology in recent years. But still there are many open questions about the survival of transplanted cells, interaction between transplanted cells and recipient microenvironment. That's why it is necessary to develop experimental models of damaged retina which allow studying the behavior of individual cells after transplantation. We used organotypic explantation culture of newborn rat neuroretina as a model to study unfluence of transplanted cells and trophic factors on neuraretina. The advantages of this model are: visualization of transplanted cells, simple analysis of their morphology, survival capacity in neuroretina, interactions with recipient tissue and migration ability. We used newborn rat neuroretina explantation culture (DMEM/F12 with 20ng/mlFGFandEGF, 7% FCS and antibiotics). After 10 days of cultivation retina pigment epithelium cells, MMSC and NSPC from the subventricular brain zone of C57BL/ B-TgCACTB-EGFP)/Osb/J GFP+ mice were transplanted into the cultured neuroretina/ explants. The immunohistochemical staining for [i-lll-tubulin and GFAP was carried out. In our study significant differece in the survival capacity and migration ability of different cell types has been demonstrated, and morphological changes of transplanted cells were have been analyzed.
В последние годы накоплен значительный экспериментальный материал в области биологии стволовых клеток и выполнено большое количество клинических работ. Однако все еще остаются открытыми вопросы о взаимодействии трансплантированных клеток с новым микроокружением реципиента и их выживаемости. Нами в качестве модели влияния трофических факторов и трансплантированных клеток на сетчатку была выбрана органотипическая эксплантационная культура сетчатки новорожденной крысы. В первую очередь данный выбор объяснятся сохранностью цитоархитектоники сетчатой оболочки глаза и клеточных взаимосвязей при данном методе культивирования. Кроме того, применение органоти-пических культур существенно облегчает микрохирургические процедуры введения клеток, давая возможность строго контролировать число и место введения клеток, и визуализации их распространения и выживаемости в сетчатке, позволяет вести прижизненные микроскопические наблюдения с любым интервалом времени и четко контролировать условия выращивания клеток. В данной работе были использованы прикрепленные культуры сетчатки новорожденных крыс Wistar, служившие моделью развивающейся нейросетчатки. Культивирование -эксплантатов сетчатки проводили в стандартных условиях в модифицированной среде DMEM/F12 с добавлением ростовых факторов, 10% сыворотки и антибиотиков. На 10-е сут. в культуры сетчаток инъецировали ксеногенные клетки мышей линии C57Bl/B-Tg(ACTB-EGFPJ/Osb/J [мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (MMCKJ, нейральные ство-ловые/прогениторные клетки (НСПЮ субвентрикулярной зоны, клетки пигментного эпителия СПЭ) глаза]. Производили прижизненные наблюдения за выживаемостью инъецированных клеток, за их миграцией на различных сроках с последующим иммуногистохимическим окрашиванием на маркеры дифференцировки клеток в глиальном и нейрональном направлениях CGFAP и fl-lll-тубулин соответственно]. Были продемонстрированы достоверные отличия в выживаемости различных типов клеток в новом микроокружении, показана наибольшая миграционная активность ММСКи НСПК в первые часы после инъекции и проанализированы морфологические изменения введенных типов клеток.