Nowadays more and more attention is turned to hepatic stellate cells (HSC) and their role in liver regeneration. Nonetheless there are several methodological questions, for example, methods of HSC isolation, their labeling and ways of transplantation. In this work we compared two different methods of HSC isolation: collagenase-pronase liver perfusion with further Histodenz density gradient centrifugation and method of Seglen for isolation of hepatocytes associated with HSC. We also analyzed diverse methods of cells labeling: membrane fluorescent labels PKH26 and with gene of green fluorescent protein (GFP), that could be get into the cells by electroporation, with chemicals like TurboFect or by adenovirus. Then cells were transplanted into rats in two ways: into lien and into system of portal vein. According to our results, we able to conclude that collagenase-pronase liver perfusion with further cells gradient centrifugation in Histodenz is better for HSC isolation than method of Seglen, the most optimal method for cells labeling is with adenovirus, expressing the GFP gene, for HSC transplantation - transplantation into system of portal vein.
На сегодняшний день всё больше исследований посвящено изучению роли звёздчатых клеток печени (ЗКП) в регенерации органа. При этом остаются нерешёнными важные методические вопросы, в частности, технология выделения ЗКП, способы мечения выделенных клеток и их наиболее эффективной трансплантации. В ходе данной работы было проведено сравнение двух методов выделения клеток: метод коллагеназно-проназной перфузии печени с последующим разделением клеток в градиенте плотности гистоденза и ассоциированного выделения ЗКП и гепатоцитов методом Сеглена. Также был проведён анализ эффективности различных методов мечения ЗКП: мембранными флуоресцентными метками РКН26 и геном зелёного флуоресцентного белка (GFP), доставляемого в клетки методом электропорации с помощью химического реагента TurboFect или аденовируса. Далее меченые клетки были трансплантированы здоровым крысам двумя методами: в селезёнку и в систему воротной вены. На основании полученных результатов можно заключить, что для выделения ЗКП оптимальным является метод коллагеназно-проназной перфузии печени с последующим разделением клеток в градиенте плотности гистоденза, для мечения клеток - доставка гена GFP аденовирусом, для трансплантации - введение клеток в систему воротной вены.