Safety, Legal Aspects, and Current State of Research on Biomedical Cell Products and Drugs Derived Using Induced Pluripotent Stem Cell Technology

Full Text

Введение

Клеточная терапия – одна из областей регенеративной медицины, основанная на использовании различных типов клеток для восстановления нарушенных функций тканей или органов. Такая терапия может быть локальной либо системной, и почти всегда проводится с минимально инвазивным вмешательством [1]. В настоящее время задача восстановления поврежденных тканей и органов в рамках клеточной терапии преимущественно решается с помощью технологий применения соматических клеток пациента (аутологичных) или донора (аллогенных). Однако инвазивность получения биоптатов большинства тканей человеческого организма побуждает научное сообщество рассматривать возможность терапии с помощью стволовых клеток, способных к дифференцировке в необходимый для терапии клеточный тип.

Одним из источников клеток для клеточной терапии являются мультипотентные мехзенхимальные стволовые клетки (ММСК). ММСК представлены гетерогенной популяцией, они могут быть выделены из тканей организма взрослого человека (таких как костный мозг, жировая ткань, пульпа зуба), а также тканей плода (например, пуповины) и способны дифференцироваться в широкий спектр типов негематопоэтических клеток. В настоящее время это наиболее часто применяемый тип стволовых клеток, используемый для разработки биомедицинских клеточных продуктов (БМКП) благодаря их высокой пролиферативной активности, относительной простоты выделения и ограниченному потенциалу к развитию только в клетки, происходящие из мезодермы, в отличие от плюрипотентных стволовых клеток (ПСК), способных дифференцироваться в клетки трех первичных зародышевых листков [2].

Другой тип клеток – эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) – обладает плюрипотентностью, однако его применению препятствуют как этические проблемы, связанные с источником получения – тканями человеческого эмбриона, так и риски туморогенности и иммунного отторжения [3]. Клиническое исследование лекарственного препарата GRNOPC1 компании Geron Corporation (США), представляющего собой клетки-предшественницы олигодендроцитов, полученные из ЭСК человека, для лечения спинномозговой травмы стало одним из самых громких событий в истории регенеративной медицины за последние несколько лет. Первоначально препарат получил разрешение Управления по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США (FDA) на проведение клинических исследований в начале 2009 года, однако вскоре они были приостановлены, когда в ходе параллельно осуществляющихся исследований на животных была обнаружена повышенная частота образования микрокист в регенерировавших участках тканей [4].

Альтернативой использования ЭСК стал способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) из соматических клеток взрослого человека через их репрограммирование с помощью нескольких факторов транскрипции, впервые описанный в 2007 году [5, 6]. Тогда две независимые исследовательские группы под руководством Шиньи Яманака в Киотском Университете (Kyoto University, Япония) и Джеймса Томсона в Висконсинском университете в Мэдисоне (University of Wisconsin-Madison, США) получили плюрипотентные стволовые клетки (ПСК) из фибробластов человека. Список факторов транскрипции, известных как факторы Яманаки, включает Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc. Смесь для репрограммирования Томсона немного отличается от «коктейля» Яманаки и состоит из трех факторов транскрипции, ассоциированных с плюрипотентностью: Oct4, Sox2 и Nanog, а также РНК-связывающего белка Lin28, который связывается с мРНК IGF-2 (инсулиноподобный фактор роста 2) и усиливает его трансляцию [5, 6, 7, 8].

Данная технология открывает широкие возможности создания адгезионных и суспензионных клеточных культур и органоидов (в том числе 3Д клеточных культур), дифференцированных из ИПСК, и применимых в качестве моделей заболеваний для фундаментальных исследований, скрининга и персонифицированного подбора лекарственных препаратов, а также клеток, дифференциированных из ИПСК, в качестве основного действующего компонента или одного из компонентов биомедицинских клеточных продуктов (БМКП).

В связи с тем, что продукты на основе клеток являются сложными для стандартизации объектами по сравнению с традиционными лекарственными препаратами, процесс оценки их безопасности и эффективности имеет свои особенности при планировании доклинических и клинических исследований [9], а также оценки соотношения риск-польза.

В данной обзорной статье рассмотрены особенности получения культур ИПСК; безопасность применения дифференциированных из них соматических клеток в терапевтических целях; нормативно-правовое регулирование проведения доклинических и клинических исследований ИПСК, дифференциированных из них клеток, и БМКП, разрабатываемых на основе технологии ИПСК, в странах Европейского Союза, США и России. Описано состояние клинических исследований БМКП, полученных с использованием технологии ИПСК, в мире и состояние доклинических исследований БМКП, полученных с использованием технологии ИПСК, в России.

Безопасность применения ИПСК в медицинских целях

Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) ранее привлекли большое внимание исследователей всего мира из-за практически неограниченного потенциала дифференцировки, сопоставимого с ЭСК. ИПСК могут быть получены из соматических клеток пациента, предоставляя многочисленные возможности персонифицированной медицины (Рисунок 1). Однако, главной проблемой потенциального клинического применения данного типа клеток является их склонность к формированию новообразований, таких как тератомы. Тератомы представляют собой доброкачественные опухоли, содержащие дифференцированные ткани. Так же, как и ЭСК, ИПСК образуют тератомы с клетками-производными всех трех зародышевых листков при инъекции иммунодефицитным мышам [10, 11, 12, 13, 14]. Несмотря на критику некоторых авторов, тест на формирование тератом в иммунодефицитных мышах (тератомный тест) широко применяется для анализа плюрипотентности клеток различных биологических видов, наряду с ПЦР-ОТ анализом, идентифицирующим гены-маркеры плюрипотентного состояния культуры клеток [10].

Рисунок 1. Получение и применение ИПСК в клеточной терапии.

ИПСК – индуцированые плюрипотентные стволовые клетки, РПЭ – ретинальный пигментный эпителий. Рисунок подготовлен авторами с использованием шаблонов biorender.com.

Figure 1. Preparation and application of iPSCs in cell therapy.

This figure is prepared by the autors using the templates from biorender.com.

Проведенное в 2011 году исследование, направленное на восстановление двигательных функций после травм спинного мозга у мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом показало, что после трансплантации животным нейросфер, полученных из ИПСК человека, их клетки дифференцировались в три линии различных типов нейронов: нейроны, астроциты и олигодендроциты. Клетки нейросфер стимулировали повторный рост нервных волокон поврежденного спинного мозга, поддерживали миелинизацию и формировали синапсы. Данная положительная динамика наблюдалась в течение 112 дней эксперимента без формирования новообразований [15]. Тем не менее, последующее исследование той же научной группы показало, что отдельные клоны ИПСК человека, в итоге инициировали рост опухолей на более поздних сроках эксперимента [16]. В 2022 г. были зафиксированы случаи образования тератом у людей после применения инсулин-продуцирующих клеток, дифференцированных из ИПСК для лечения сахарного диабета [17]. Таким образом, FDA считает образование тератом основным препятствием для регенеративной медицины на основе стволовых клеток.

Показано, что использующиеся в целях регенеративной медицины клетки, дифференцированные из ИПСК, могут вызывать туморогенность за счет возобновления эктопической экспрессии генов Oct4, Sox2, Klf4 и c-Myc, содержащихся в вирусном векторе, который используется для их получения. Одним из способов избежать этой ситуации является применение промоторов, контролируемых экзогенными веществами, добавляемыми в культуральную среду, такими как тетрациклин и доксициклин, что позволяет регулировать транскрипцию трансгена [18, 19].

Кроме того, применение клеточных продуктов на основе соматических клеток, полученных из ИПСК в терапевтических целях, может привести к формированию новообразований из-из наличия в данных продуктах единичных остаточных недифференцированных или не полностью дифференцированных ИПСК, обладающими высоким пролиферативным потенциалом [20]. Существуют подходы для удаления остаточных ИПСК и промежуточных продуктов их дифференцировки из дифференцированных клеточных культур путем избирательного устранения высокопролиферативных клеток с использованием химиотерапевтических препаратов, таких как доксорубицин, или путем избирательного устранения клеток, вступающих в реакцию со щелочной фосфатазой [21].

В связи с тем, что в настоящее время ИПСК могут быть получены с высокой эффективностью только с использованием вышеописанных генетических конструкций, считается, что они менее безопасны и более туморогенны, чем ЭСК [12]. Показано, что введение ИПСК человека развивает тератому более эффективно и быстро, чем ЭСК человека, у иммунодефицитных мышей независимо от места инъекции [22].

Все трансгены, которые применяют для получения культур ИПСК, ассоциированы с онкологией тем или иным образом. Некоторые из них, согласно научной литературе, являются известными протоонкогенами, включая члены семейства Myc. Однако, показано, что замена последовательности фактора транскрипции с-Myc генами других семейств многократно снижает эффективность формирования культуры ИПСК. В настоящее время ДНК c-Myc наиболее часто заменяют последовательностью L-Myc. Это связано с тем, что L-Myc обладает более низкой активностью к трансформации генома клеток, и стимулирует образование культуры ИПСК человека более эффективно и специфично по сравнению с диким типом c-Myc. В исследованиях in vivo L-Myc мог передаваться по зародышевой линии, но не стимулировал образование опухолей у химерных мышей (которым были введены ИПСК, полученные с помощью ретровируса L-Myc) на протяжении всего срока наблюдения эксперимента – в течение 2 лет [23].

Помимо этого, несмотря на то, что большинство научных коллективов склоняются считать, что пациент-специфичные ИПСК не являются иммуногенными при проведении аутологичных трансплантаций, Zhao T. и его коллеги продемонстрировали, что дифференциированные из ИПСК клетки мыши могут вызывать иммунный ответ у сингенных мышей [24, 25].

Нормативно-правовое регулирование использования ИПСК в Европе и США

В настоящее время в США и Европе существует несколько руководств по использованию биомедицинских продуктов, представляющих собой клетки или ткани, в том числе стволовые клетки и дифференциированные из них соматические клетки для терапевтического применения. В частности, это руководство по терапии соматическими клетками человека и генной терапии (guidance for human somatic cell therapy and gene therapy) Управления по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США (FDA) [26] и руководство по лекарственным препаратам на основе клеток человека (guideline on human cell-based medicinal products) Европейского агентства по лекарственным средствам (EMA)¹. Ассоциации специалистов, такие как Международное общество исследований стволовых клеток (ISSCR), отдельно разработали специальные руководства по использованию стволовых клеток в клеточной терапии с привлечением экспертов со всего мира, такие как руководство по проведению исследований стволовых клеток и их клиническому применению (guidelines for stem cell research and clinical translation)² [27]. Данные нормативно-правовые документы имеют много тождественных положений и отличаются друг от друга в основном незначительными вопросами. По их мнению, наиболее важными темами, связанными с этическими, правовыми и социальными аспектами клеточной терапии, являются: (1) обеспечение высококачественных клинических условий производства и характеристики клеток, (2) обеспечение конфиденциальности личной и медицинской информации доноров биологического материала, (3) добровольное информированное согласие пациентов, (4) особенности генетической модификации клеток и (5) особенности регистрации интеллектуальной собственности на разработанные биомедицинские продукты [28].

В США терапия соматическими клетками, как и биологические лекарственные препараты, регулируется в соответствии с разделом 351 закона о службе общественного здравоохранения (Public Health Service Act section 351), а также 21 разделом свода федеральных правил (Code of Federal Regulations, CFR). В связи с тем, что для продуктов клеточной терапии FDA использует существующую нормативно-правовую базу, разработанную для традиционных лекарственных и биологических препаратов, это имеет свои преимущества, но в то же время и недостатки, так как сами продукты имеют ряд уникальных характеристик, которые отличаются от традиционных лекарственных препаратов. FDA признает, что существуют некоторые аспекты, которые являются специфическими для клеточных продуктов. Во-первых, это размер производственной партии, которая, как правило, ограничена количеством биологического материала и может быть представлена одной дозой или несколькими дозами для персонифицированной терапии только одного пациента. Во-вторых, это сроки производства, тестирования, хранения и возможного введения продукта в организм пациента. Многие клеточные продукты не могут быть криоконсервированы и должны быть введены как можно скорее после их получения. В этих случаях процедуры тестирования, транспортировки и введения должны быть быстрыми, чтобы гарантировать качество и целостность продукта клеточной терапии. Другие проблемы включают сложности с воспроизводимостью партий продукта, в связи с тем, что каждого пациента или донора биологического материала будет немного иной профиль, полученный в результате биопсии или афереза клеточного материала. Еще одна проблема — стерильность; продукты клеточной терапии не могут быть окончательно стерилизованы. Для поддержания чистых условий необходима асептическая обработка. С точки зрения контроля качества, при осуществлении производственного процесса необходимо проводить внутрипроизводственное тестирование на промежуточных стадиях готовности продукта и тестирование готового продукта или партий готового продукта, а также тестирование их стабильной воспроизводимости³. Также 21 раздел свода федеральных правил регламентирует принципы надлежащей производственной практики (good manufacturing practice, GMP), изложенные в пунктах 210 и 211, которые применяются к продуктам, полученным из стволовых клеток, и распространяются как на производственные процессы, так и на продукт, разработанный и производимый на данной производственной площадке [29]. В ряде штатов США предусмотрены ограничения или полный запрет на проведение исследований с использованием эмбриональных стволовых клеток, а также запрет на создание человеческих эмбрионов для медицинских исследований [30].

В Европе клеточные продукты категории лекарственных средств передовой терапии (Advanced therapy medicinal products, ATMP) контролируют более строго, чем большинство других лекарственных средств. К ATMP относят инновационные лекарственные препараты, основанные на клеточной терапии или генной терапии⁴ [28]. Критерии, которым должен соответствовать препарат, чтобы быть классифицирован как ATMP, определены в статье 17 Регламента (ЕС) № 1394/2007 Европейской комиссии⁵ и регулируются Правилами регулирования лекарственных препаратов в Европейском Союзе – EudraLex, томом 4, частью IV, вступивших в силу с 22 мая 2018 г ⁶.

Так как получение ИПСК требует специфических генетических манипуляций, терапевтически значимые клетки, дифференцированные из ИПСК, должны проходить строгий контроль производственного процесса в соответствии со стандартами GMP⁷. Важные аспекты производства ATMP в соответствии со стандартами GMP включают соблюдение условий, предъявляемых к чистоте помещения, процедурам мониторинга исследований, качества и биобезопасности производственного процесса, клеточного банкирования, а также требования к качеству оборудования, реактивов и расходных материалов, надлежащей утилизации отходов. Тесты контроля качества ATMP направлены на мониторинг и обеспечение отсутствия опасности в отношении четырех основных характеристик: (1) идентичность партий, (2) чистота получаемого клеточного продукта, (3) безопасность и (4) эффективность его применения. Таким образом, использование клеток, дифференцированных из ИПСК, в терапевтических целях требует внедрения ряда контролей на основе соблюдения принципов GMP и оценки рисков данной терапии. Важно отметить, что такие клеточные продукты необходимо валидировать для обеспечения постоянства качества. Согласно последним рекомендациям GMP для ATMP, находящихся на стадии доклинических исследований, экспериментальные процедуры не требуют полной валидации, тогда как ATMP, находящиеся на стадии клинических исследований (а также продукты, которые получили разрешение на продажу) требуют полной валидации на заключительных фазах клинических исследований⁸ [28].

Также в Европе нормативно-правовые акты, регламентирующие использование стволовых клеток, в частности, ИПСК, уникальны для каждой отдельной страны. Однако, они имеют некоторые общие положения, например, исследования на эмбрионах, включая получение культур эмбриональных стволовых клеток, запрещены. Применение импортных линий ЭСК в исследовательских целях в отдельных странах разрешено, однако находится под строгим контролем (Австрия, Германия, Швейцария, Чехия и др.). Также в Чехии, Швейцарии, Финляндии, Болгарии, Испании ЭСК для биомедицинских исследований могут быть получены из избыточных эмбрионов, оставшихся после завершения проведения процедуры ЭКО, которые не могут быть использованы в дальнейших программах ЭКО из-за их качества или генетической патологии. Данные эмбрионы должны быть либо не старше 7 дней (Чехия, Швейцария), либо в соответствии с законодательствами отдельных стран – исследования могут быть проведены только в течение 14 дней от момента получения эмбрионов (Финляндия, Швеция) и могут быть использованы только при условии получения добровольного информированного согласия родительской пары. Несмотря на наличие нормативно-правовой базы, регламентирующей исследования ЭСК, во многих странах отсутствует законодательство, регулирующее доклинические и клинические исследования ИПСК, в некоторых странах вовсе нет специального законодательства, контролирующего исследования стволовых клеток человека (Греция, Ирландия, Португалия)⁹.

Отдельно следует отметить, что в настоящее время не существует международного утвержденного руководства по тестированию туморогенности в продуктах клеточной терапии. Таким образом, устранение туморогенности в БМКП, полученных из ИПСК, и разработка единого общепризнанного протокола тестирования данных БМКП на предмет туморогенности является актуальной проблемой для фармацевтической промышленности (биотехнологических компаний и научных учреждений) всего мира [20].

Нормативно-правовое регулирование использования ИПСК в России

В России основными документами, регламентирующими производство и применение БМКП, содержащих стволовые и соматические клетки в медицинских целях, являются: Постановление Правительства Российской Федерации от 28 марта 2024 г. № 384 «Об утверждении Правил обращения биомедицинских клеточных продуктов, предназначенных для исполнения индивидуального медицинского назначения биомедицинского клеточного продукта, специально произведенного для отдельного пациента непосредственно в медицинской организации, в которой применяется данный биомедицинский клеточный продукт»¹⁰; Федеральный закон от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах»¹¹; Приказ Министерства здравоохранения РФ и Российской академии наук (РАН) от 4 июня 2015 г. № 306н/3 «Об утверждении перечня объектов трансплантации»¹²; Приказ Министерства здравоохранения РФ от 25 июля 2003 № 325 «О развитии клеточных технологий в Российской Федерации»¹³.

В настоящее время продолжается формирование нормативно-правовой базы: 1 марта 2025 года приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 3 мая 2024 г. № 580-ст был введён национальный стандарт РФ ГОСТ Р ИСО 24603-2024 «Биотехнология. Биобанкинг. Требования к плюрипотентным стволовым клеткам человека и мыши»¹⁴, а также 26 марта 2025 г. вступило в силу решение Совета Евразийской экономической комиссии от 22 января 2025 г. № 13 «О внесении изменения в Правила проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза»¹⁵.

Национальный стандарт РФ ГОСТ Р ИСО 24603-2024 регламентирует процессы получения, характеристики, культивирования, контроля качества, банкирования, транспортирования и утилизации плюрипотентных стволовых клеток человека и мыши и содержит «примеры подходящих методов создания и культивирования линий плюрипотентных стволовых клеток», таких как ЭСК и ИПСК. В том числе, в документе указано, что для получения культуры ИПСК можно использовать различные комбинации факторов репрограммирования, «например, человеческий OCT4, SOX2, NANOG, LIN28, L-MYC, KLF4 и SV40LT. Эти гены клонируют в соответствующих экспрессионных кассетах в эписомальных векторах». Отдельно отмечено, что «тетраплоидная комплементация запрещена при оценке плюрипотентности ПСК человека» со ссылкой на руководство ISSCR по исследованиям стволовых клеток и их клиническому применению (c изменениями в 2021 году)¹⁶ [31], а также что «в случае репрограммированных ИПСК, продолжающаяся экспрессия факторов репрограммирования из используемых векторов репрограммирования может повлиять на способность линии ИПСК к правильной и эффективной дифференцировке. Устранение эктопической экспрессии факторов репрограммирования должно быть подтверждено и задокументировано». Помимо этого, в тексте документа указано, что «ввиду этических и законодательных ограничений запрещено проводить другие анализы плюрипотентности ПСК человека in vivo» кроме анализа на тератому – «такие как образование химер и тетраплоидная комплементация».

В решении Совета Евразийской экономической комиссии от 22 января 2025 г. № 13 содержатся требования к проведению клинических исследований и «доклинических исследований, необходимых для оценки доказательства концепции и биораспределения лекарственного препарата, для выявления потенциальных органов-мишеней токсичности, получения сведений о выборе дозы для клинических исследований и обоснования пути введения и схемы дозирования. Раздел по доклиническим исследованиям содержит текущие представления о требованиях к проведению доклинических исследований и специальный раздел по изучению генетически модифицированных клеток на основе химерных антигенных рецепторов (CAR) и Т-клеточных рецепторов (TCR), на основе индуцированных плюрипотентных стволовых клеток и генетически модифицированных клеток, получаемых в результате редактирования генома». Помимо прочего, документ содержит раздел «10.3.2. Лекарственные препараты на основе клеток, получаемых из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток», в котором обозначено, что «Риск инсерционного мутагенеза, онкогенности и туморогенности, обусловленный терапевтическим использованием производных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, связан с использованием интегрирующих вирусных векторов и индуцированной плюрипотентностью», а также что «индуцированные плюрипотентные стволовые клетки относятся к типу клеток, обладающих высоким риском развития туморогенности, поскольку они могут образовывать тератомы in vivo. Необходимо использовать современные методы контроля процесса производства и стратегий доклинических исследований для оценки риска развития туморогенности, обусловленного плюрипотентностью клеток». В случае, если клетки трансдуцируют векторами, способными к интеграции в геном (например, гамма-ретровирусными или лентивирусными), «необходимо тщательно оценить риск инсерционного мутагенеза и, как следствие, возможного онкогенеза», а также «указать в регистрационном досье любую стратегию, направленную на сокращение риска инсерционного мутагенеза (например, использование гамма-ретровирусного или лентивирусного вектора с самоинактивирующейся конфигурацией)».

C 1 сентября 2025 года вступает в силу совместный приказ Минздрава России №150н и РАН №1 от 25.03.2025 «Об утверждении перечня объектов трансплантации», который признаёт утратившим силу приказ от 4 июня 2015 года №306н/3 с внесёнными в него изменениями. Документ определяет органы и ткани, которые могут быть использованы для трансплантации в медицинских целях в соответствии с действующим законодательством, однако не освещает вопроса о возможности получения этих тканей из ИПСК.

Следует отметить, что в настоящее время нормативно-правовая база РФ не предусматривает запретительных действий на применение какого-либо типа стволовых клеток в медицинских целях [32]. Однако, как и в большинстве стран мира, она накладывает ряд ограничений на получение БМКП из тканей человеческого эмбриона, а также регламентирует недопустимость купли-продажи биологического материала. Так, согласно Статье 3 Федерального закона от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ недопустимо создание «эмбриона человека в целях производства биомедицинских клеточных продуктов», также недопустимо использование «для разработки, производства и применения биомедицинских клеточных продуктов биологического материала, полученного путем прерывания процесса развития эмбриона или плода человека или нарушения такого процесса». Согласно национальному стандарту РФ ГОСТ Р ИСО 24603-2024 «исследования, включая развитие бластоцист человека in vitro с использованием плюрипотентных стволовых клеток, не должны превышать 14 дней».

Клинические исследования БМКП, полученных с использованием технологии ИПСК, в мире

В настоящее время в мире проходят доклинические и клинические исследования БМКП, полученных с использованием технологии ИПСК, с целью изучения их потенциала в производстве соматических клеток, способных заменять поврежденные или дисфункциональные ткани.

Первое некоммерческое клиническое исследование с использованием ИПСК для широкого применения было проведено в 2008 году¹⁷. В 2013 году Центр биологии развития RIKEN (Кобе, Япония) и Центр исследований и применения ИПСК-клеток Киотского университета CiRA (Киото, Япония) запустили первое в мире клиническое исследование клеточного терапевтического продукта, представляющего собой лист клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ) сетчатки, полученный из аутологичных ИПСК. В 2014 году было осуществлено лечение первого пациента с возрастной макулярной дегенерацией (ВМД), через год прогрессирование потери зрения у пациента остановилось. В 2017 году тем же научным коллективом нескольким другим пациентам были пересажены листы клеток РПЭ сетчатки, полученные из аллогенных ИПСК, однако у одного из пациентов было зафиксировано образование преретинальной мембраны, вызванное либо аномальным ростом клеток, входящих в состав БМКП, либо протоколом инъекции согласно мнению руководителя научной группы ^{18, 19, 20, 21}. В декабре 2019 года Национальный институт здравоохранения США (NIH) объявил о проведении Национальным института глаза (NEI) первого в США клинического исcледования по выполнению субретинальной трансплантации РПЭ сетчатки, полученного из аутологичных ИПСК (iRPE). Целью исследования являлось восстановление потери зрения у людей возрастной группы «55-и лет и старше» с сухой формой ВМД ^{22, 23 ,24, 25}. В настоящее время в мире проводится несколько клинических исследований, изучающих безопасность и возможности применения клеток или клеточных листов РПЭ, полученных из ИПСК при ВМД (NCT05991986, NCT05445063) и пигментном ретините (NCT06891885).

Японские ученые также начали клинические исследования для оценки эффективности применения ИПСК при заболеваниях сердца. В 2019 году трем пациентам с симптомами выраженной сердечной недостаточности (III класса или выше по классификации Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA)) были выполнены заплаты из кардиомиоцитов, полученных из аллогенных ИПСК, на переднюю и боковую стенки левого желудочка. В течение года наблюдения у пациентов было зафиксировано улучшение симптомов сердечной недостаточности и не было отмечено побочных эффектов, связанных с трансплантированными клеточными листами ²⁶ [33]. Еще одно – многоцентровое клиническое исследование I/II фазы, известное как LAPiS (NCT04945018) было начато в 2022 году японской компанией Heartseed Inc. Его целью является оценка безопасности и эффективности сфероидов кардиомиоцитов, полученных из ИПСК (HS-001), пересаженных десяти пациентам с тяжёлой степенью сердечной недостаточностью и ишемической болезнью сердца (ИБС), в течение 26 недель после трансплантации.

Научный коллектив из Китая компании Help Therapeutics в 2021-2025 годах начал три клинических исследования (NCT03763136, NCT05566600, NCT06866600) безопасности и эффективности применения кардиомиоцитов, полученных из аллогенных ИПСК, для терапии сердечной недостаточности [34]. Аналогичные исследования начаты в 2023 году в США: компанией HeartWorks будет изучена гетерогенная популяция клеток сердечной линии, дифференциированная из аутологичных ИПСК (iPSC-CL), у людей с врожденным пороком сердца и терминальной стадией систолической сердечной недостаточности, определяемой как IV класс по классификации NYHA с аномальной визуально оцениваемой фракцией выброса ниже 40% (NCT05647213)²⁷. Результаты данных исследований пока не опубликованы.

В 2016 году австралийская компания Cynata Therapeutics Limited запустила клиническое исследование БМКП, полученного из аллогенных ИПСК (CYP-001), для лечения реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ). Основной целью 1 фазы была оценка безопасности и переносимости CYP-001, в то время как вторичными целями была оценка эффективности на основе доли участников, которые показали полный ответ (CR), общий ответ (OR) и общую выживаемость (OS) к 28 и 100 дню исследования. В соответствии с официальными данными о полученных результатах, CYP-001 был безопасен и хорошо переносился его участниками, не было зафиксировано серьезных побочных эффектов. Показатели OR, CR и OS к 100 дню составили 86,7%, 53,3% и 86,7% соответственно [35]. В настоящее время продукт проходит клиническое исследование 2 фазы для применения по показанию «РТПХ», компания также тестирует данный БМКП для терапии критической ишемии конечностей (КИК) и остеоартрита (ОА)²⁸.

Американская фармацевтическая компания Fate Therapeutics разрабатывает продукты NK и CAR-T клеток, полученные из ИПСК, для терапии солидных опухолей. C 2019 года были начаты два клинических исследования продукта NK-клеточной терапии под названием FT500. Однако в 2022 году клиническое исследование 1 фазы было завершено (NCT03841110), а в 2023 году еще одно – обсервационное исследование было прекращено по инициативе спонсора (NCT04106167). В Китае в Университете Zhejiang в 2023 и 2024 годах начаты два клинических исследования по оценке безопасности и эффективности CAR-NK клеток, нацеленных на CLL1, полученных из ИПСК, у пациентов с рецидивирующим или рефрактерным острым миелобластным лейкозом (ОМЛ) (NCT06027853, NCT06367673). Показано, что молекула лектина типа 1C (CLL1) – антиген клеточной поверхности, экспрессируется лейкозными гемопоэтическими стволовыми клетками и миелобластами при ОМЛ, и практически не экспрессируется нормальными гемопоэтическими стволовыми клетками. Таким образом, CLL1 является потенциальной мишенью для CAR-T и CAR-NK терапии при ОМЛ. Показано, что по сравнению с контрольными Т-клетками, CAR-T-клетки, нацеленные на CLL1, эффективно уничтожают CLL1-положительные линии клеток ОМЛ и первичные опухолевые клетки in vitro. Кроме того, такие химерные клетки проявляют значительную противоопухолевую активность в моделях ксенотрансплантации гемопоэтических стволовых клеток человека мышам [36]. Одним из новых перспективных исследований также выступает CALiPSO-1 – многоцентровое клиническое исследование 1 фазы, начатое в 2024 году для оценки безопасности и эффективности CAR-NK-клеток, нацеленных на CD19, полученных из ИПСК (CNTY-101) у пациентов с рефрактерными аутоиммунными заболеваниями, опосредованными В-клетками, такими как: умеренная и тяжелая форма системной красной волчанки (СКВ)/волчаночный нефрит (ВН), идиопатические воспалительные миопатии (ИВМ) и диффузный кожный системный склероз (ДКСС) (NCT06255028).

ИПСК могут быть также применены в качестве БМКП для терапии нейродегенеративных заболеваний. Несколько начатых в Китае в 2023-2025 годах клинических исследований направлены на выявление положительного эффекта трансплантации в ткани головного мозга нейрональных предшественников, дифференциированных из ИПСК, для лечения болезни Паркинсона и бокового амниотрофического склероза (БАС). Одним из них выступает исследование биотехнологической компании Shanghai UniXell Biotechnology Co., Ltd (NCT06778265) заключающееся в оценке безопасности, переносимости и потенциальной эффективности продукта UX-DA001, представляющего собой дофаминергические клетки-предшественники среднего мозга (DAPs), полученные из аутологичных ИПСК, трансплантация которых осуществляется в вентральную область тегментума путем стереотаксической нейрохирургической операции. Аналогичные клинические исследования стериотаксической трансплантации в скорлупу полосатого тела (путамен) DAPs, полученных из аутологичных ИПСК, будут проведены биотехнологической компанией iCamuno Biotherapeutics Ltd. (NCT06821529) и коллаборацией биотехнологической компании XellSmart Biomedical и Shanghai East Hospital (NCT06145711). Другое исследование, проводимое Shanghai East Hospital, ориентировано на изучение профиля безопасности клеток-предшественников двигательных нейронов, дифференциированных из ИПСК, которые будут трансплантированны в желудочки головного мозга трем пациентам с БАС (NCT06765564). Помимо этого, в США с 2024 года University of California осуществляет 1/2 фазу клинического исследования безопасности и эффективности трансплантации в скорлупу полосатого тела DAPs, дифференциированных из ИПСК, при болезни Паркинсона (CT1-DAP001). Также в США с 2024 года Massachusetts General Hospital проводит клиническое исследование целесообразности и безопасности трансплантации в скорлупу полосатого тела (путамен) DAPs, полученных из аутологичных ИПСК (NCT06687837). В апреле 2025 года были опубликованы результаты I/II фазы клинических исследований дофаминергических клеток, полученных из ИПСК, для лечения болезни Паркинсона, проведенные в университетской больнице Киото (Япония) [37] (идентификационный номер клинического исследования в регистре клинических исследований Японии: jRCT2090220384²⁹). Семь пациентов в возрасте от 50 до 69 лет получили двустороннюю трансплантацию дофаминергических предшественников, дифференциированных из аллогенных ИПСК. Первичные результаты исследования были сосредоточены на безопасности и побочных эффектах терапии (в том числе формировании новообразований в течение 24 месяцев), в то время как вторичные результаты оценивали изменения двигательных симптомов и выработку дофамина в течение 24 месяцев. По его итогам серьезных нежелательных побочных явлений (НПЯ) не наблюдалось, однако было зарегистрировано 73 случая НПЯ легкой и средней степени тяжести. Среди шести пациентов, у которых оценивали эффективность по унифицированной шкале оценки болезни Паркинсона международного общества расстройств движений (MDS UPDRS³⁰), у четырех наблюдалось улучшение показателей OFF³¹, а у пяти – улучшение показателей по шкале ON²⁶. Средние изменения у всех шести пациентов составили 9,5 баллов (20,4%) и 4,3 балла (35,7%) для показателей OFF и ON соответственно. У четырёх пациентов улучшились показатели по шкале Хоэна-Яра. Значения константы скорости притока (Ki) фтор-18-l-дигидроксифенилаланина (18F-ДОФА) в скорлупе полосатого тела увеличились на 44,7%, причем в группе с высокой дозой данное увеличение было более значительным. Коллектив исследования констатирует, что аллогенные дофаминергические предшественники, полученные из ИПСК, выживали, вырабатывали дофамин и не образовывали опухолей, и делает вывод о их безопасности и потенциальной клинической пользе при лечении болезни Паркинсона.

Другим направлением в области неврологии являются исследования, целью которых выступает восстановление тканей головного мозга после ишемического инсульта. В клиническом исследовании, организованном Hopstem Biotechnology Inc. (Китай) и начатом в 2023 году будет оценен профиль безопасности и максимально переносимая доза нейронных клеток-предшественников прозэнцефалона головного мозга человека (hNPC01), полученных из ИПСК, и вводимых в возрастающих дозах посредством однократной инъекции в ишемизированные ткани головного мозга пациентам со стабильным хроническим ишемическим инсультом (NCT06299033). Еще в одном клиническом исследовании, проводимом Xuanwu Hospital (Китай) с 2024 года, будет оценена безопасность и эффективность внутривенного введения экзосом, полученных ИПСК (GD-iExo-003), при остром ишемическом инсульте (NCT06138210).

В контрасте с 2008-2013 годами, в которые были проведены единичные клинические исследования БМКП, разработанных с применением технологии ИПСК, к 2021 году общее количество таких исследований в мире возросло до 54³². По состоянию на март 2025 года на сайте clinical trials.gov по запросам «iPS» и «iPSC» найдено 101 зарегистрированное клиническое исследование, однако 28 из них находятся в статусе «завершено», 8 в статусе «прекращено», у 14 статус неизвестен, одно исследование имеет статус «отозвано» и только 34 исследования находятся в статусе набора пациентов или недавно были одобрены и в скором времени начнут набирать пациентов, а также одно исследование завершило набор пациентов и находится в активной фазе. В таблице 1 представлены реализуемые в настоящее время клинические исследования БМКП, полученные с использованием технологии ИПСК, согласно порталу ClinicalTrials.gov³³.

Таблица 1. Клинические исследования, осуществляемые в мире в 2020-2032 годах согласно сведениям, содержащимся в ClinicalTrials.gov³⁴.

Доклинические исследования БМКП, полученных с использованием технологии ИПСК, в России

В настоящее время в Российской Федерации не выявлено клинических исследований БМКП, полученных с применением технологии ИПСК согласно Государственному реестру лекарственных средств (ГРЛС)³⁵. С 2011 года осуществляются научно-исследовательские работы (НИР), связанные с использованием технологии ИПСК для восстановления поврежденных тканей и органов, согласно Единой государственной информационной системе учета научно-исследовательских, опытно-конструкторских и технологических работ гражданского назначения (ЕГИСУ НИОКТР). В настоящее время осуществляются четыре исследования, целью которых является разработка БМКП, полученных с использованием технологии ИПСК. Сведения о данных НИР представлены в таблице 2.

Таблица 2. Доклинические исследования, осуществляемые в Российской Федерации в 2023-2027 годах согласно сведениям, содержащимся в ЕГИСУ НИОКТР³⁶.

Заключение

С момента своего открытия менее двух десятилетий назад технология ИПСК обозначила многообещающие перспективы для фундаментальных научных исследований и разработок лекарственной терапии в области регенеративной медицины. ИПСК могут быть дифференцированы в большинство типов соматических клеток и модифицированы с помощью методов генной инженерии, а также обладают способностью к практически неограниченному масштабированию. С ростом понимания механизмов репрограммирования соматических клеток продолжают появляться новые методы клинически и экономически эффективного получения ИПСК. Развивается направление разработки клеточных моделей, дифференциированных из ИПСК, для изучения механизмов развития различных заболеваний человека: наследственных, спорадических, болезней пожилого возраста; а также скрининга лекарственных препаратов и их персонифицированного подбора для пациента.

Наконец, в последнее десятилетие значимо развивается разработка БМКП на основе технологии ИПСК. Активно проводятся доклинические и ранние фазы клинических исследований. Эти исследования сосредоточены на различных неврологических и нейродегенеративных, онкологических, сердечно-сосудистых, иммунологических, эндокринологических, офтальмологических и других заболеваниях. Однако следует учитывать, что по сравнению с фармакологической терапией клеточная терапия, в том числе на основе технологии ИПСК, чрезвычайно сложна и может сопровождаться серьезными проблемами, связанными с безопасностью ее применения, обеспечением постоянства качества партий, ограниченными сроками хранения, и соответственно, введения пациенту готового продукта.

Серьезную озабоченность научного сообщества вызывает способность ИПСК к образованию тератом, поэтому компаниям-разработчикам БМКП крайне важно гарантировать тот факт, что недифференцированные ИПСК и промежуточные продукты их дифференцировки полностью удалены из клеточного продукта, который будет трансплантирован пациенту, для предотвращения формирование опухолей.

В настоящее время отсутствует полностью сформированная нормативно-правовая база, регламентирующая полный цикл работ при доклинических. клинических исследованиях и производстве БМКП, не существует международного руководства по тестированию туморогенности в продуктах клеточной терапии не только в России, но и других странах. Тем не менее реализация успехов фундаментальной науки во многом зависит от формирования правового поля при использовании данных технологий. Комплексный подход в отношении нормативно-правового регулирования позволит определить возможности и ограничения терапии с применением стволовых клеток, в том числе ИПСК. Таким образом, разработка новых или пересмотр имеющихся нормативно-правовых актов, направленных на решение задач клеточной терапии, регулирования всех этапов доклинических и клинических исследований, производства и оборота БМКП, будет способствовать появлению новых подходов в стратегии использования ИПСК в целях регенеративной медицины.

¹ Guideline on human cell-based medicinal products. Режим доступа:

https://www.ema.europa.eu/documents/scientific-guideline/guideline-human-cell-based-medicinal-products_en.pdf.

² The International Society for stem cell research. guidelines for stem cell research and clinical translation. Режим доступа: https://www.isscr.org/guidelines.

³ FDA. Cellular Therapy Products. Режим доступа: https://www.fda.gov/media/81678/download.

⁴ EMA. Advanced therapy medicinal products: overview. Режим доступа: https://www.ema.europa.eu/en/human-regulatory-overview/advanced-therapy-medicinal-products-overview.

⁵ European Union. Access to European Union law. Regulation (EC) No 1394/2007 of the European Parliament and of the Council of 13 November 2007 on advanced therapy medicinal products and amending Directive 2001/83/EC and Regulation (EC) No 726/2004 (Text with EEA relevance). Режим доступа: https://eur-lex.europa.eu/eli/reg/2007/1394/oj/eng.

⁶ EudraLex - Volume 4 - Good Manufacturing Practice (GMP) guidelines. Режим доступа: https://health.ec.europa.eu/medicinal-products/eudralex/eudralex-volume-4_en.

⁷ Good Manufacturing Practice (надлежащая производственная практика) это – международный стандарт, устанавливающий требования к производству и контролю качества на фармацевтических, пищевых и высокотехнологичных предприятиях, а также при производстве медицинского оборудования и расходных материалов.

⁸ EudraLex The Rules Governing Medicinal Products in the European Union Volume 4 Good Manufacturing Practice Guidelines on Good Manufacturing Practice specific to Advanced Therapy Medicinal Products. Режим доступа: https://health.ec.europa.eu/document/download/ad33d9dd-03f0-4bef-af53-21308ce2187d_en?filename=2017_11_22_guidelines_gmp_for_atmps.pdf.

⁹ Regulation of stem cell research in Europe. EuroStemCell. Режим доступа: https://www.eurostemcell.org/regulation-stem-cell-research-europe.

¹⁰ Постановление Правительства Российской Федерации от 28 марта 2024 г. № 384 «Об утверждении Правил обращения биомедицинских клеточных продуктов, предназначенных для исполнения индивидуального медицинского назначения биомедицинского клеточного продукта, специально произведенного для отдельного пациента непосредственно в медицинской организации, в которой применяется данный биомедицинский клеточный продукт». Режим доступа: http://government.ru/docs/all/152710/.

¹¹ Федеральный закон от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах. Режим доступа: http://government.ru/docs/all/107215/

¹² Приказ Министерства здравоохранения РФ и Российской академии наук (РАН) от 4 июня 2015 г. № 306н/3 «Об утверждении перечня объектов трансплантации». Режим доступа: https://minzdrav.gov.ru/documents/9199-prikaz-ministerstva-zdravoohraneniya-rf-i-rossiyskoy-akademii-nauk-ot-4-iyunya-2015-g-306n-3-ob-utverzhdenii-perechnya-ob-ektov-transplantatsii.

¹³ Приказ Министерства здравоохранения РФ от 25 июля 2003 № 325 «О развитии клеточных технологий в Российской Федерации». Режим доступа: https://base.garant.ru/4179455/.

¹⁴ ГОСТ Р ИСО 24603-2024 «Биотехнология. Биобанкинг. Требования к плюрипотентным стволовым клеткам человека и мыши». Режим доступа: https://www.rst.gov.ru/portal/gost/home/standarts/catalognational?portal:componentId=3503536e-2ac1-4753-8ed1-09a92fee02de&portal:isSecure=false&portal:portletMode=view&navigationalstate=JBPNS_rO0ABXc6AAZhY3Rpb24AAAABABBjb25jcmV0ZURvY3VtZW50AAZkb2NfaWQAAAABAAU0ODQyMQAHX19FT0ZfXw**.

¹⁵ Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 22 января 2025 г. № 13 «О внесении изменения в Правила проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза». Режим доступа: https://docs.eaeunion.org/documents/447/9877/.

¹⁶ The International Society for stem cell research. guidelines for stem cell research and clinical translation. Режим доступа: https://www.isscr.org/guidelines.

¹⁷ The state of iPS cell clinical trials in 2021. Режим доступа: https://bioinformant.com/ips-cell-clinical-trials/.

¹⁸ Green light for launch of clinical research using donor iPS cells. Режим доступа: https://www.riken.jp/en/news_pubs/news/2017/20170207_1/.

¹⁹ Riken. Center for developmental biology. Clinical safety study using autologous iPSC-derived retinal cell sheet for AMD. Режим доступа: http://www.cdb.riken.jp/en/news/2017/researches/0404_10328.html

²⁰ Stem cell treatments for macular degeneration. Режим доступа: https://bioinformant.com/stem-cell-treatments-macular-degeneration/.

²¹ The Niche. Adverse event in IPS cell trial for vision loss in Japan: initial perspectives. Режим доступа: https://ipscell.com/2018/01/adverse-event-in-ips-cell-trial-for-vision-loss-in-japan/.

²² Stem cell treatments macular degeneration. Режим доступа: https://bioinformant.com/stem-cell-treatments-macular-degeneration/.

²³ Clinical trial highlight: stem cell transplants for dry AMD. Режим доступа: https://www.nei.nih.gov/learn-about-eye-health/eye-conditions-and-diseases/age-related-macular-degeneration/clinical-trial-highlight-stem-cell-transplants-dry-amd.

²⁴ Сlinicaltrials.gov (NCT04339764). Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/study/NCT04339764.

²⁵ NIH launches first us clinical trial patient derived stem cell therapy replace and repair dying. Режим доступа: https://www.nei.nih.gov/about/news-and-events/news/nih-launches-first-us-clinical-trial-patient-derived-stem-cell-therapy-replace-and-repair-dying.

²⁶The state of iPS cell clinical trials in 2021. Режим доступа: https://bioinformant.com/ips-cell-clinical-trials/.

²⁷ HeartWorks clinical trials for CHD. Режим доступа: https://heartworksinc.org/clinical-trials.

²⁸ Induced Pluripotent Stem Cell (iPS cell) applications in 2024. Режим доступа: https://bioinformant.com/ips-cell-applications/.

²⁹ Japan registry of clinical trials. Kyoto Trial to Evaluate the Safety and Efficacy of iPSC-derived dopaminergic progenitors in the treatment of Parkinson's Disease (Киотское исследование по оценке безопасности и эффективности дофаминергических предшественников, полученных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, для лечения болезни Паркинсона) (jRCT2090220384). Режим доступа: https://jrct.mhlw.go.jp/en-latest-detail/jRCT2090220384.

³⁰ Унифицированная шкала оценки болезни Паркинсона международного общества расстройств движений (MDS UPDRS). Режим доступа: https://mds.movementdisorders.org/UserFiles/file/MDS-UPDRS_Russian.pdf.

³¹ В контексте болезни Паркинсона "OFF" означает период, когда лекарства, в особенности леводопа, не дают ожидаемого эффекта, и двигательные симптомы возвращаются; "ON" означает период, когда лекарственный препарат перестает работать, и симптомы болезни Паркинсона вновь проявляются.

³² The state of iPS cell clinical trials in 2021. Режим доступа: https://bioinformant.com/ips-cell-clinical-trials/.

³³ ClinicalTrials.gov. Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/.

[34^] Там же.

³⁵ Государственный реестр лекарственных средств. Режим доступа: https://grls.minzdrav.gov.ru/Default.aspx.

³⁶ Информация о данных НИР доступна в ЕГИСУ НИОКТР, размещенной на домене «Наука и инновации» по адресу: https://gisnauka.ru/.

About the authors

Elena Valerievna Galitsyna

Email: galitsynaev@mednet.ru
ORCID iD: 0000-0003-2305-4936
SPIN-code: 2751-1747
Scopus Author ID: 57193354943
ResearcherId: K-1158-2018

Ведущий специалист, Отдел экспертизы,
Координационный центр исследований и разработок в области медицинской
науки

Natalya Alexandrovna Ulyakina

Email: ulyakinana@mednet.ru
ORCID iD: 0000-0003-0187-1898
SPIN-code: 4361-1951

Alexander Borisovich Gusev

Email: gusevab@mednet.ru
ORCID iD: 0000-0001-9063-0601
SPIN-code: 4004-6894
ResearcherId: J-9829-2014

Georgiy K Vladimirov

Author for correspondence.
Email: vladimirovgk@mednet.ru
ORCID iD: 0000-0001-8136-9931
SPIN-code: 8474-7767

References

Supplementary files