Razrabotka novogo sposoba intraoperatsionnoy otsenki regeneratornogo potentsiala pecheni na osnove mul'tiparametricheskogo imidzhinga

Abstract

Full Text

Регенерация печени является основным механизмом восстановительного процесса при травмах и после хирургической резекции. Интраоперационная оценка регенеративного потенциала печени актуальна для прогнозирования состояния органа и пациента после операции. Стандартные диагностические тесты (УЗИ, СПеКт КТ, МРТ, морфология, биохимические анализы) не решает эту задачу. Для этой цели мы предлагаем разработать способ безконтрастной (label free) оценки состояния печени на основе многофотонной микроскопии с функцией метаболического имиджинга (FLIM) и генерации второй гармоники (SHG). Чтобы разработать метод интраоперационной оценки состояния печени, мы провели экспериментальные исследования на животных: моделирование холеста-за, цирроза печени, жирового гепатоза, 30% и 70% резекции печени с оценкой метаболических и структурных изменений в нормальной печени, при развитии патологии и регенерации. Мы также проанализировали свежие хирургические образцы печени пациентов после резекции. Использовался многофотонный микроскоп LSM 880 с FLIM и SHG, Мультифотонный томограф JenLab. Полученные результаты были проверены с помощью химического картирования TOF-SIMS, морфологического и иммуногистохимического анализа с идентификацией рекрутированных стволовых клеток. Были выявлены характерные особенности холеста-за - резкое увеличение сигнала билирубина в канале FAD и цирроза - увеличение полей сигнала ГВГ. Жировой ге-патоз характеризовался внутриклоеточным накоплением жировых капель при отсутствии сигнала от эндогенных флуорофоров по всем каналам. Изменения печени у модельных животных совпали с данными на хирургических образцах пациентов. При всех патологических состояниях отмечалось образование зон поврежденных клеток с пониженной интенсивностью сигнала НАДН и уменьшением вклада связанной формы. При регенерации, напротив, на 3 день наблюдалось увеличение количества активно пролиферирующих клеток с усиленным образованием энергии (увеличение связанной формы НАДН).