MICRORNA FROM TPO (+) EXOSOM AS POTENTIAL MARKER FOR DIFFERENTIATING MALIGNANT AND BENING FORMS OF FOLCULAR THYROID TUMORS

Abstract

Full Text

Одна из основных проблем в диагностике узловых образований щитовидной железы - отсутствие методов оценки степени злокачественности фолликулярных образований на дооперационном этапе. Тонкоигольная аспирационная биопсия - наиболее информативный метод дифференциальной диагностики заболеваний щитовидной железы, его точность составляет порядка 95%. Однако, цитологическое исследование не позволяет идентифицировать фолликулярный рак щитовидной железы (ФРЩЖ), лишь позволяя определить риск злокачественности: 1040% для фолликулярной неоплазии (Bethesda IV), 6-28% для фолликулярного изменения неопределенного значения (Bethesda III). Альтернативой может быть жидкостная биопсия, в частности, выделение из плазмы мембранных везикул (экзосом) и анализ экзосомальной микроРНК. Известно, что опухолевые клетки секретируют специфический набор микроРНК в состав экзосом. С учетом того, что экзосомы вовлечены в развитие патологических процессов, анализ состава микроРНК циркулирующих в крови экзосом можно рассматривать как новый перспективный метод диагностики рака щитовидной железы и как способ дифференцировки фолликулярной аденомы (ФА) и фолликулярного рака (ФРЩЖ). При этом выделение и анализ ткане-специфичной фракции везикул может повысить диагностическую ценность метода. Экзосомы выделяли из плазмы крови пациентов с гистологически верифицированным диагнозом ФА и ФРЩЖ методом ультрацентрифугирования (Optima XPN-80 Beckman Coulter). Из общей популяции была выделена фракция thyroid-специфичных экзосом с использованием антител против Thyroid Peroxidase с биотином (Anti-Thyroid Peroxidase/TPO antibody (Biotin) (ab240545)) и магнитных частиц, покрытых стрептави-дином (K0180 Sileks). Первичный анализ профиля концентраций экзосомальных микроРНК был проведен с помощью набора «MiRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR system» компании EXIQON. Валидация полученных данных была проведена путем микроРНК-специфич-ной обратной транскрипции и последующей ПЦР материала опухолевой РНК, полученного от 30 пациентов с ФА и 30 пациентов с ФРЩЖ. В результате анализа профиля экзосомальной ми-кроРНК было отобрано несколько микроРНК семейства Let-7, уровень концентрации которых в ТПО(+) экзосомах отличается для ФА и ФРЩЖ.