Aktivatsiya mul'tipotentnykh mezenkhimnykh stromal'nykh kletok s pomoshch'yu faktora nekroza opukholey-α proiskhodit pri uchastii interleykina-1β

Abstract

Full Text

Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (ММСК) человека - привлекательный объект исследования и применения в регенеративной медицине, гематологии и в терапии аутоиммунных заболеваний ввиду возможности направить их дифференцировку в костном, хрящевом и жировом направлениях, а также вследствие их иммуномодулирующих способностей. Для того, чтобы ММСК наиболее эффективно проявили последние, клетки можно активировать с помощью интерферона Y (IFNg), фактора некроза опухолей-а (TNFa) или других веществ. В работе изучали последствия активации ММСК TNFa и IFNg и установили связь с сигнальным путем интерлейкина-1Ь (IL1B). ММСК человека были получены от 5 доноров костного мозга (2 мужчины/3 женщины в возрасте от 18 до 40 лет) во время плановой эксфузии после подписания ими информированного согласия. Культуры клеток вели в стандартных условиях в среде aMEM c добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки. К ММСК двух доноров однократно были добавлены 20 нг/мл TNFa и 500 ед/мл IFNg. Через 1, 2, 3 и 4 суток после активации из клеток выделяли РНК и оценивали экспрессию IL1B с помощью ОТ-ПЦР. К ММСК трех других доноров добавляли TNFa до концентрации 10 нг/мл два раза в неделю при каждой смене среды. Культуры вели в течение 4 пассажей, после чего культивировали клетки один дополнительный пассаж без TNFa. Оценивали суммарную клеточную продукцию. Из клеток выделяли РНК и ДНК, оценивали уровень экспрессии IL1B. Показано, что однократное добавление TNFa приводило к увеличению экспрессии IL1B уже через сутки в 20-560 раз. Повышенный уровень экспрессии IL1B сохранялся на протяжении 4 суток после пульсовой активации ММСК. Многократное добавление TNFa к ММСК приводило к увеличению суммарной клеточной продукции в 7-65 раз в зависимости от донора. Это сопровождалось стабильно и существенно повышенным уровнем экспрессии IL1B в 60-170 раз в зависимости от образца ММСК. Отмена TNFa приводила к снижению экспрессии IL1B. Полученные результаты демонстрируют, что активация ММСК наряду с увеличением продукции иммунорегуляторных молекул вызывает повышение провоспалительных цитокинов, в частности IL1B, что следует принимать во внимание при использовании этих клеток в клеточной терапии. Степень индукции экспрессии IL1B в ММСК зависит от донора клеток. Индивидуальные различия в способности ММСК активироваться и экспрессировать различные молекулы, в том числе и IL1B, могут обуславливать различия в эффективности их применения.