Aktivatsiya angiogeneza endotelial'nykh kletok s pomoshch'yu mul'tigennykh sistem

Abstract

Full Text

В настоящее время активно разрабатываются методы лечения сосудистых заболеваний в основе которых лежат методы стимулирования естественных процессов ангиогенеза. В частности, генные конструкции, эк-прессирующие проангиогенные факторы были успешно применены во многих клинических и доклинических исследованиях. Использование сильных промоторов и мультигенных систем, позволяет усиливать ангиоген-ный потенциал и активировать формирование стабильной функциональной сети сосудов. В исследовании на базе разрешенного для клинического применения плазмидного вектора pVax1 нами были сконструированы генетические конструкции, кодирующие несколько генов интегрированные через фурин-2А-пептидные последовательности пикорновирусов . В качестве терапевтических молекул, были выбраны VEGF и (или) FGF-2, оба фактора играют важную роль на разных этапах ангиогенеза, все экспрессионные кассеты кодировали репортерный ген- DsRed. Генетически модифицированные клетки трансфицированные созданными плазмидами, стабильно экспрессировали рекомбинантные факторы. Синтез мРНК VEGF и FGF-2 был подтвержден с помощью молекулярно-генетических методов. Данные мультиплексного анализа с применением технологии Luminex®xMAP и набора Bio-PlexPro™ Human Cytokine 27-plex Assay показали, что модификация клеток не приводит к значительному сдвигу в профиле синтезируемых и секре-тируемых факторов. За исключением, концентрации рекомбинантных белков представленных в плазмидных конструкциях (VEGF и FGF2). Кондиционированная среда собранная с трансфицированных клеток оказывала стимулирующий эффект на пролиферацию и формирование капилляро-подобных структур эндотелиальными клетками in vitro. Таким образом, рекомбинантные конструкции содержащие 2А-пептидные последовательности пикарновиру-сов экспрессруют терапевтические и репортерные гены, расположенные в одной рамке считывания и обладают значительным проангиогенным потенциалом. Данные системы позволят расширить существующие возможности генной терапии в аспекте лечения ишемических заболеваний человека.