Vliyanie kontsentratsii dmso v sostave kriozashchitnoy sredy na kletochnyy sostav i zhiznesposobnost' kul'tury kletok, poluchennoy iz spinal'nykh gangliev neonatal'nykh porosyat

Abstract

Full Text

Криоконсервирование культур клеток, полученных из спинальных ганглиев (СГ), является актуальным для биомедицинских исследований и фармакологии. СГ содержат мультипотентные клетки-производные нервного гребня, способные дифференцироваться в нейроны и субпопуляцию глиальных клеток, что открывает возможность их использования в регенеративной медицине. Сегодня один из наиболее часто применяемых криопротекторов - диметилсульфоксид (ДМСО), однако в литературе накапливаются данные о высокой токсичности 10% ДМСО в составе криосред, разрабатываемых для терапевтического использования. Цель работы - исследовать влияние концентрации ДМСО в составе криозащитной среды на клеточный состав и жизнеспособность культуры клеток СГ неонатальных поросят. Суспензию клеток СГ 1 -дневных поросят получали по методу de Luca и соавт. и культивировали в среде а-МЕМ с 10% фетальной телячьей сыворотки (ФТС) и антибиотиками при 37°С в атмосфере с 5% СО2. Для криоконсервирования использовали среды на основе а-МЕМ и 25% ФТС, содержащие ДМСО в концентрациях 5, 7,5 и 10%. Криоконсервирование проводили по трехэтапной программе замораживания с начальной скоростью 0,5°С/мин. до -20°С, далее со скоростью 1 °С/ мин. до -80°С с последующим погружением в жидкий азот. Контроль - интактная культура. Установлено, что культура клеток СГ неонатальных поросят гетерогенна по составу. Она содержит тела чувствительных нейронов и нейроглиальные клетки. Нейроглия была представлена 3 морфологическими типами клеток: крупными распластанными мультиполярны-ми клетками, мелкими веретеновидными клетками с двумя небольшими отростками, полигональными клетками с удлиненными отростками. Было установлено, что криоконсервирование культуры клеток в среде, содержащей 7,5% ДМСО, сохраняет все вышеописанные морфологические типы клеток, а также позволяет получить до 90% жизнеспособных клеток после отогрева. Использование ДМСО в концентрациях 5 или 10% менее предпочтительно, поскольку тогда данный показатель не превышает 83%. Концентрация ДМСО в криозащитной среде не оказывала влияния на скорость формирования монослоя после размораживания образцов Таким образом, для криоконсервирования культуры клеток СГ неонатальных поросят оптимально использование 7,5% ДМСО, так как это позволяет сохранить жизнеспособность и морфологические характеристики культуры на уровне, близком к интактной. Все вышесказанное позволяет рекомендовать данный состав среды для низкотемпературного консервирования культур клеток, полученных из нервных ганглиев.