A programme of cryoconservation and morphofunctional characterization of a cell population derived from an embryonic liver

Для разработки программы криоконсервирования гемопоэтических клеток эмбриональной печени использован метод многофакторных экспериментов 23, при выполнении которого варьировали следующие факторы: концентрацию криопротектора, скорость замораживания до температуры кристаллизации и длительность выдержки [адаптации] на этапе кристаллизации образца. Это позволило выявить закономерности взаимодействия параметров криоконсервирования и сформулировать гипотезу об устранении основных механизмов криоповреждения путем варьирования скоростями снижения температуры, концентрацией криопротектора, инициацией процесса кристаллизации и температурными остановками для изменения характера кристаллообразования в замораживаемом объекте. Функцией отклика служила сохранность клеток-предшественниц грануломоноцитопоэза [КОЕ-ГМ].
Как показали результаты экспериментов, область исследованных режимов является оптимальной и позволяет получить сохранность КОЕ-ГМ от 50 до 90%. При устранении влияния неконтролируемых параметров максимальное количество колоний и кластеров [95-98%] после криоконсервирования образуют ге-мопоэтические клетки, замороженные с криопротекто-ром ДМСО [0,4-0,7 моль/л], со скоростью охлаждения 0,5-1,5° С/мин., инициацией кристаллообразования и 10-минутной выдержкой при температуре адаптации - 5-10°С. Этот режим был проверен многократными экспериментами при замораживании кроветворных клеток эмбриональной печени.