Vliyanie vitalizatsii implantiruemogo detsellyulyarizirovannogo mezhkletochnogo matriksa na techenie ranevogo protsessa v myshechnoy tkani

Abstract

Full Text

Одним из наиболее перспективных способов лечения объемного повреждения мышечной ткани признается замещение дефекта тканеинженерными конструкциями на основе децеллюляризированно-го межклеточного матрикса. В экспериментальных исследованиях для замещения объемных дефектов мышечной ткани используются как бесклеточные, так и заселенные клетками (витализированные) матриксы. Результаты исследований, направленных на сравнение эффективности имплантации бесклеточ-ных и витализированных матриксов, однако, весьма противоречивы. Целью исследования являлось изучение влияния витализации децеллюляризирован-ного межклеточного матрикса, полученного из мышечной ткани на течение раневого процесса после экспериментального повреждения скелетной мышцы. Децеллюляризация поперечно-полосатой мышечной ткани осуществлялась 1% раствором доде-цилсульфата натрия в течение 72 ч. с последующей промывкой образца в 1% растворе тритона-Х100, что, как было показано нами ранее, вызывает достаточное удаление клеточного материала из мышечной ткани с сохранением структуры матрикса. После децеллюляризации образец помещался для дополнительной отмывки в фосфатно-солевой буфер (PBS) на 72 ч. Образцы стерилизовались в 1% растворе надуксусной кислоты и хранились в растворе PBS с пенициллин-стрептомицином 100U-100 мгк/мл, гентамицином 80 мкг/мл, и ам-фотерицином В 80 мгк/мл. Матриксы витализиро-вались мультипотентными мезенхимальными стро-мальными клетками (ММСК) десны кролика. Для этого на матриксы размерами 10x10x10 мм наносили несколько капель суспензии ММСК (концентрация 2 млн/мл) троекратно 3-4 раза в течение часа. После этого конструкция заливалась культуральной средой и инкубировалась в стандартных условиях. Исследование выполнено на 16 кроликах породы Новозеландская белая, матриксы имплантировались в дефект длиннейшей мышцы спины, с одной стороны имплантировался витализированный матрикс, в контрлатеральную мышцу - бесклеточный. Кролики выводились из эксперимента на 35 сут., образцы мышц с имплантированными тканеинженерными конструкциями забирались для гистологического исследования. Послеоперационный период имплантации у всех животных протекал без осложнений, при заборе образцов тканей визуально не наблюдалось местной реакции на имплантированные конструкции. При гистологическом исследовании во всех случаях выявлены резорбция и реконструкция имплантированного материала, сопровождающиеся активным миогенезом. Была выявлена инфильтрация матрикса гистиоцитами и сегментоядерными нейтрофила-ми. В отдельных случаях наблюдалось прорастание имплантированных конструкций кровеносными сосудами и нервными волокнами. Не было выявлено значимых различий между витализированными и бесклеточными конструкциями.