Izmeneniya morfologii mezenkhimnykh stromal'nykh kletok endometriya pri modelirovanii regenerativnykh protsessov in vitro

Abstract

Full Text

Слизистая оболочка матки (эндометрий) женщины репродуктивного возраста обладает уникальной для человека способностью к ранозаживлению путем регенерации во время менструации [1]. Для осуществления данного процесса сохранившимся клеткам необходимо заместить часть утраченных таким образом, чтобы полностью восстановить нормальную структуру эндометрия. Во время менструации они подвергаются воздействию различных стимулов, в том числе паракринных. Известно, что менструальная кровь отличается по составу от периферической и может быть определена как отделяемое из раны [2]. Мы предположили, что в менструальной крови содержатся уникальные растворимые факторы, необходимые для регенерации эндометрия после повреждения в ходе менструации. Для проверки данной гипотезы мы выделили мезенхимные стромальные клетки эндометрия (эМСК) центрифугированием менструальной крови на 15% йодиксаноле при 500 g в течение 40 мин. Полученные эМСК культивировали в среде DMEM/F-12 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС) в стандартных условиях (37°С, 5% CO2). На 4 пассаже был определен иммунофенотип клеток: CD73 + , CD90 + , CD105 + , CD146+/-, CD45-, CD14-, CD20-, CD34-, HLA-DRII-. На 7 пассаже от того же донора единовременно получали сыворотку периферической крови (СПК) и сыворотку менструальной крови (СМК). После разведения образцов DMEM/ F12 и выравнивания концентрации белка объемная доля СПК и СМК в полученных средах составила 10% и 9,3% соответственно. В течение 5 сут. эМСК культивировали с добавлением СМК, СПК или ФБС. Оценку морфологии клеток осуществляли с использованием системы прижизненной съемки Incucyte ZOOM. При культивировании эМСК с ФБС или СПК клетки были более распластанными, имели неровные края и зернистость цитоплазмы вокруг ядра. При культивировании c СМК в первые 72 ч. клетки приобретали веретенообразную форму, с вытянутыми заостренными концами и более ровными краями. Зернистость цитоплазмы вокруг ядра практически Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 93 отсутствовала. После 72 ч. культивирования, по достижении 100% конфлюэнтности клетки теряли веретенообразную форму, становясь полигонально-звездчатыми. Края оставались ровными. Значительная часть клеток уменьшались в размере. Полученные данные позволяют утверждать, что в СМК содержатся уникальные растворимые факторы, изменяющие морфологию эМСК. Возможно, феномен, полученный нами in vitro, отражает события, происходящие in vivo при ранозаживлении эндометрия путем регенерации во время менструации.