Influence stromal-vascularis fractions of cells of a bone brain on healing of skin wounds at mice

Abstract

Full Text

Сегодня стали широкоизвестными данные, что мультипотентные мезенхимальные сромальные клетки (ММСК) положительно влияют на регенеративные процессы различных тканей за счет высокого уровня пролиферативного потенциала и способности к дифференцировке в разные зрелые типы клеток (хондро-циты, остеоциты и адипоциты) обеспечивая микроокружение гемопоэтических стволовых клеток. МСК обладают иммуномодулирующими свойствами, что позволяет разсматривать их в качестве средств предупреждения и лечения иммунопатологических процессов. Известно также, что МСК принимают участие в регенероации целесности кожи после повреждений, тоесть реализуют репаративный гистогенез в дерме. Целью работы являлось изучение влияния различных стромально-васкулярных фракций (СВФ) клеток, полученых из костного мозга, на скорость заживления кожных ран у мышей. Материалы и методы. Стромально-васкулярную фракцию клеток костного мозга получали согласно методике S. Jang и соавт. (2010), после адгезии суспензии клеток в течение 3 и 24 ч инкубации на пластиковых чашках Петри. Культивирование проводили в полной питательной среде ДМЕМ с 10% телячей сывороткой и 0,02 мл гентамицина в СО2-инкубаторе. Мышам наносили открытую рану размером 1 см 2 согласно методике (Н.Л. Курилко и др. 2009 ). Проведено несколько экспериментов: животным на 1-е и 3-е сутки после нанесения раны под раневую поверхность вводили клетки СВФ, адгезирова-ные в течение 3 ч, на 21-е сутки культивирования в концентрации 1,6x105 клеток на животное. Мышам второй группы под рану вводили клетки стромально-васкулярной фракции после 24 ч адгезии, на 21-е сут. культивирования в концентрации 0,6x105 клеток на животное. Экспериментальным животным третей группы под рану вводили питательную среду ДМЕМ - контрольная группа. Результаты. Установлено, что усредненный диаметр раны в контрольной группе животных на 6-е сут. после нанесения раны составлял 0,94±0,05 см, на 10-е сут. уменьшался до 0,78 ±0,05 см, а на 14-е сут. диаметр раны составлял 0,16±0,08 см. При введении СВФ клеток костного мозга, которые адгезировались в течение 3 ч на пластике, и затем длительно культивировались (21 сут.), усредненный диаметр раны на 6-е сут. равнялся 1,0±0,04 см, на 10-е 0,93±0,01 см, а на 14-е сут. уменьшился до 0,66±0,06 см, что указывает на то, что клетки, полученные после 3-часовой адгезии, угнетают регенерацию кожи, тогда, как введение клеток, полученных из костного мозга после 24 ч адгезии ускоряют заживление кожной раны. Так, диаметр раны у животных третьей группы на 6-е сут. составлял 0,77±0,10 см и был достоверно меньше, чем в контроле, на 10-е сут. уменьшался до 0,49±0,03 см, а на 14-е сут. диаметр раны уменьшился до 0,08±0,05 см, что указывает на достоверное ускорение заживления раны. Полученные результаты показали, что введение стромально-васкулярной фракции клеток костного мозга, адгезированых в течение 3 ч или 24 ч к пластику и после длительного культивирования (21 день), по разному влияют на заживление кожной раны у линейных мышей - клетки, сорбирующие на пластике быстро (3 ч), тормозят регенерацию, а клетки 24часовой адгезии обладали стимулирующей способностью к заживлению ран. Следовательно, в составе стромально-васкулярной фракции адгезированных клеток костного мозга имеется, как минимум две популяции клеток, с разной биологической активностю, которая выявляется после длительного культивирования. Вероятно эти клетки находятся на разных стадиях превращения в ММСК или же это разные по функции предшественники ММСК. Выводы. Среди стромально-васкулярной фракции адгезированных клеток костного мозга мышей содержатся клетки, которые способны подавлять или стимулировать заживление ран у животных, то есть способны влиять на регенеративные и, вероятно, воспалительные процессы в коже.