Поиск Кабинет

Выделение стволовых клеток пуповинной крови с помощью автоматической функционально закрытой системы Sepax

Гены & Клетки: Том I, №2, 2006 год, стр.: 76-77

 

Авторы

Котус Е.В.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Пуповинная кровь (ПК) используется в качестве источника гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) для проведения трансплантации при лечении ряда гематологических и наследственных заболеваний. Существуют различные методы процессирования пуповинной крови для уменьшения общего объема, удаления эритроцитов, тромбоцитов и сохранения максимального количества гемопоэтических прогениторных клеток. Цель данного обзора - показать результаты обработки пуповинной крови на автоматическом сепараторе Sepax (Biosafe), представляющим собой мобильную и компактную систему с многочисленными протоколами для выделения стволовых клеток из ПК, мобилизированной периферической крови и костного мозга. Закрытая система расходных материалов включает в себя сепарационную камеру вариабельного объема, что позволяет обработать любой объем исходного образца, мешки для сбора плазмы и эритроцитов, а также возможно наличие криомешка на 25 мл для фракции buffy-coat (комплект расходных материалов CS-530, CS-540). Один из многочисленных дизайнов расходных материалов представлен на рис. 1.

Первые экспериментальные работы по оценке данного аппаратного метода были проведены в 1999 г. в гематологической лаборатории Медицинского Университета г. Басле (Швейцария) [1 ]. Было обработано 10 образцов ПК по протоколу «UCB» v.110 без использования дополнительных се-диментирующих агентов. ПК поступала в сепарационную камеру, подвергалась центрифугированию. Разделение компонентов ПК происходило в соответствии с их размером и плотностью. Далее компоненты последовательно экстрагировались в соответствующие мешки для сбора, лейкоконцентрат поступал непосредственно в криомешок. Наличие оптического сенсора и набора клапанов позволяло точно контролировать процесс экстракции. Принцип сепарации показан на рис. 2. Время прохождения процедуры 15 мин. Среднее значение уменьшения объема ПК составило 70%. Полученные данные представлены в табл. 1.

Сравнительные данные по обработке ПК с гидроксиэтилк-рахмалом автоматическим методом по протоколу «UCB-HES» v.160 и ручным по методу Рубинштейна [4] были проведены Бельгийским банком пуповинной крови [5]. Результаты работы представлены в табл. 3.

Таким образом, автоматический метод позволяет достичь высокого выхода ядросодержащих клеток в конечном продукте, с небольшим улучшением показателей относительно ручной сепарации. Содержание прогениторных клеток более 90% от начального количества. Конечный продукт характеризуется высокой жизнеспособностью - 97% и низким гематокритом, что в конечном итоге будет означать высокую жизнеспособность после размораживания. Элиминируется риск микробиологической контаминации и потери образца. Дополнительным преимуществом автоматизации является значительное сокращение времени процедуры до 35 мин [протокол «UCB-HES») по сравнению с ручным методом - 2 ч 30 мин, также увеличивается воспроизводимость результатов и возможна стандартизация отчета о проведении процедуры. Пример распечатки данных о процедуре приведен на рис. 3.

Аппарат Sepax [рис. 4) прежде всего интересен Банкам ПК, где есть заинтересованность к хранению большого количества образцов на минимальной площади.

Подняться вверх сайта