Поиск Кабинет

Сравнительное исследование влияния дермальных фибробластов и мультипотентных мезенхимных стромальных клеток, заключенных в коллагеновый гель, на регенерацию десны

Гены & Клетки: Том VIII, №2, 2013 год, стр.: 35-43

 

Авторы

Бармашева А.А., Николаенко Н.С., Самусенко И.А., Орехова Л.Ю., Пинаев Г.П.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Целью настоящей работы являлось сравнение эф фективности применения дермальных фибробластов и мультипотентных мезенхимных стромальных клеток, за ключенных в коллагеновый гель, при хирургическом вме шательстве по устранению дефицита прикрепленной сли зистой полости рта на модели рецессии десны. Показано, что применение культивированных клеток, заключенных в коллагеновый гель, позволяет получить к 180 сут. наблю дения больший объем десны, чем применение стандартной методики устранения рецессии. Гистологическое строение восстановленной десны соответствовало норме.

Рецессия десны представляет собой смещение края десны в апикальном направлении без развития клинически видимых признаков воспаления, сопро вождающееся обнажением поверхности корня зуба. Пациенты с рецессией десны чаще всего обращают ся к стоматологу с жалобами на нарушение эстетики или появление гиперecтезии зубов. Имеются дан ные, что рецессия различной степени встречается у приблизительно половины населения планеты[1]. Распространенность этой патологии увеличивается с возрастом[2, 3], встречаясь, например, у 58–62% людей старше 30 лет[2, 4, 5]. По распространен ности выделяют одиночные и множественные рецес сии. Локализованная рецессия чаще всего располо жена в области центральных резцов нижней челюсти[6, 7], клыков и первых премоляров верхней челюсти[8, 4].

Самой распространенной и активно применяе мой в мире классификацией рецессии десны яв ляется классификация, предложенная Миллером в 1985 г. Ее основным преимуществом перед другими классификациями является возможность прогнозирования эффективности будущего хирургического лечения. Только при рецессии I и II класса возможно закрытие всей поверхности корня зуба. При рецессии III класса поверхность корня на 100% закрыть нельзя. Успешное лечение при рецессии IV класса невозможно[9].

В зависимости от клинической картины и причин возникновения для устранения рецессии применя ют различные хирургические методы, в частности, ряд лоскутных операций, использование свободно го десневого трансплантанта. Золотым стандартом устранения рецессии десны в настоящее время счи тается применение субэпителиального соединитель но-тканного трансплантанта в сочетании с коронарно смещаемым лоскутом. Метод обеспечивает высо кий процент закрытия поверхности корня, быстрое заживление, меньший послеоперационный дис комфорт, по сравнению с другими способами[10, 11]. Однако лимитирующим фактором при его при менении является ширина дефекта, зависящая от снижения высоты межальвеолярных перегородок и степени потери мягких тканей[9].

Для улучшения результатов хирургического ле чения пациентов с рецессией было предложено использование барьерных мембран, которые фик сируют над поверхностью корня зуба (техника GTR), обеспечивая пространство для регенерации тканей[12–14]. Применение техники GTR способствует увеличению уровня клинического прикрепления, уменьшению высоты видимой коронковой части зуба, снижению кровоточивости при зондировании[15, 16]. Однако его применение также имеет опре деленные недостатки и противопоказания, в частно сти, его нельзя применять при множественных узких рецессиях[17, 18], при тонком биотипе десны[19].

До настоящего времени создание эффективных технологий устранения дефицита слизистой оболоч ки полости рта является актуальной проблемой сто матологии. Перспективным направлением восста новления структуры и функциональной активности поврежденных тканей является тканеинженерное. Его базовая концепция включает создание трехмер ных «эквивалентов» тканей, состоящих из носителей и различных типов клеток, в частности, фибробла стов[20, 21]. Для восстановления соединительной ткани десны могут быть использованы культивируе мые клетки в виде суспензии или в полимерном геле[22, 23]. Положительные результаты при устранении рецессии десны или восстановлении межзубного со сочка были получены при использовании факторов роста[24] и аутогенных фибробластов совместно с техникой GTR[25]. Применение во время хирур гического вмешательства сосудисто-стромальной фракции клеток жировой ткани, содержащей муль типотентные мезенхимные стромальные клетки (ММСК) (Mucograft®, IntelliCell, США), позволило получить через 6 мес. после операции до 3,0 мм прироста десны[11]. Также в результате рандомини зированного контролируемого исследования, направ ленного на сравнение эффективности коллагеновых мембран, заселенных аутогенными фибробластами, и техники GTR с коллагеновой мембраной при рецес сии (I класса по Миллеру) было показано преимуще ство первого метода[26].

В настоящее время имеются данные, что куль тивируемые ММСК и фибробласты имеют близкий иммунофенотип и мультипотентность, то есть могут дифференцироваться по крайней мере в трех ор тодоксальных направлениях: остеогенном, адипо генном и хондрогенном[27, 28]. Однако, с другой стороны, у этих клеток есть различия в морфологии и размерах, в составе синтезируемых компонентов внеклеточного матрикса и других биологически ак тивных веществ[29, 30]. В связи с этим возникает вопрос, какой тип клеток и какой носитель для этих клеток эффективнее использовать при решении раз личных задач в рамках «регенеративной медицины», в частности, в стоматологии при создании тканеин женерных эквивалентов для реконструкции десны. Согласно литературным данным для восстановле ния соединительной ткани десны могут быть исполь зованы культивируемые дермальные фибробласты или ММСК в виде суспензии или в полимерном геле[22, 23]. В то же время для ускорения заживления глубоких и обширных повреждений дермы, вызван ных ожогами или другими причинами, успешно при меняют дермальный эквивалент, состоящий из куль тивируемых дермальных аллогенных фибробластов взрослых доноров, заключенных в гель коллагена I типа[31, 32]. Этот тип тканеинженерного эквива лента позволяет восстановить большой объем соединительной ткани, поэтому применение при хирур гическом вмешательстве аллогенных дермальных фибробластов или ММСК, заключенных в коллаге новый гель, может способствовать реконструкции достаточного объема мягких тканей полости рта. Целью настоящей работы являлось сравнение эффективности применения дермальных фибробла стов и ММСК, заключенных в коллагеновый гель, при хирургическом вмешательстве по устранению рецессии десны закрытием рецессии коронарно смещенным лоскутом.

Материал и методы

Выделение и культивирование фибробластов. В работе использовали новорожденных кроликов по роды Шиншилла. Согласно правилам работы с лабо раторными животными применяли стандартные пре параты для премедикации и наркоза. Фибробласты кожи новорожденного кролика (ФКНК) выделяли методом миграции из фрагментов кожи. Кожу про мывали раствором PBS и нарезали на небольшие фрагменты (3–5 мм). Затем помещали в чашки Пе три (Nunc, Дания), накрывали покровным стеклом и добавляли среду DMEM (ICN, США), содержащую 18% эмбриональной сыворотки коров (Gibco, США) и смесь пенициллина и стрептомицина в концен трации по 100 мкг/мл каждого (Invitrogen, Велико британия). Клетки культивировали в СО2 инкубаторе (5% СО2, 95% воздуха) при температуре 37°С. Ми грация клеток из кусочков кожи начиналась через 3–5 сут., через 14–20 суток на дне чашки фибробла сты образовывали монослой. Пассировали клетки с помощью раствора смеси трипсина (0,25%) и ЭДТА (0,02%) на физиологическом буфере (Invitrogen, Великобритания). В работе были использованы фибробласты 2–7 пассажа. Со 2 пассажа клетки культивировали в среде αMEM (Sigma, США), содер жащей 10% сыворотки эмбрионов коров (HyClone, США) и смесь пенициллина/стрептомицина в стан дартной концентрации.

Выделение и культивирование ММСК. Извлека ли плоские кости таза новорожденного кролика и помещали их в раствор PBS с добавлением пени циллина и стрептомицина. С костей удаляли мягкие ткани и промывали в растворе PBS. Кости рассекали скальпелем и осторожно вымывали раствором PBS костный мозг при помощи шприца с иглой 23 гош. Ядросодержащие клетки костного мозга выделяли согласно модифицированному методу[33]. Для этого костный мозг суспендировали в 2 мл раствора PBS, суспензию наслаивали на 3 мл раствора гистопака (Sigma, США) плотности 1,077 г/мл и центрифугиро вали в режиме (800 g, 20 мин) при комнатной тем пературе. Клетки, находящиеся в интерфазном слое гистопака (в основном, ядросодержащие клетки), переносили в другую пробирку и центрифугировали в десяти объемах раствора PBS при 600 g в течение 15 мин при комнатной температуре для очистки от гистопака. Промытые клетки суспендировали в куль туральной среде αMEM (Sigma, США), содержащей 10% сыворотки эмбрионов коров (HyClone, США) и смесь пенициллина/стрептомицина в стандартной концентрации. Подсчет ядросодержащих клеток про водили под инвертированным микроскопом, исполь зуя счетчик форменных элементов крови. Клетки вы севали в чашки Петри в концентрации 1×106 кл/см2 и культивировали в СО2 инкубаторе (5% СО2, 95% воздуха) при температуре 37°С. При культивирова нии получали популяцию ММСК, образующих моно слой на дне чашки Петри. Пассировали клетки с помощью раствора смеси трипсина (0,25%) и ЭДТА (0,02%) на физиологическом буфере (Invitrogen, Великобритания). В экспериментах использовали клетки 2–7 пассажа.

Подготовка коллагенового геля с клетками. Для получения коллагенового геля использовали кол лаген I типа, полученный из сухожилий крысиных хвостов по стандартной методике[34, 35]. Для до стижения ионной физиологической силы в охлаж денный раствор коллагена, разбавленный в уксусной кислоте, вносили в концентрированную (10×) пита тельную среду 199 (Sigma, США). Подводили рH раствора до нейтрального значения путем добавле ния стерильного 0,34 М раствора NaOH. После чего в полученный раствор быстро добавляли суспензию клеток в среде α-МЕМ с 10% эмбриональной сыво роткой коров из расчета 1–1,5×106 клеток в 1 мл геля. Конечная концентрация коллагена в геле была 3 мг/мл.

Методика выполнения оперативного вмешатель ства на мягких тканях полости рта кролика. Опе ративные вмешательства выполняли на верхней и нижней челюстях кроликов породы Шиншилла (n = 7) возрастом 6–12 мес. Выбор кролика в каче стве модельного животного обусловлен его большей «практичностью», по сравнению с другими модель ными животными: поскольку это животное имеет достаточно большие размеры, в его десну необхо димо вносить достаточно большой объем экспери ментального материала, в то же время наблюдать за процессом регенерации слизистой технически удоб нее, получаются более точные данные.

Для премедикации и наркоза применяли Zoletil50 (Virbac, Франция) из расчета 1–2 мг/кг в комбина ции с 2% раствором Xylazin (Bioveta, Чехия) из рас чета 0,05 мг/кг. Местно выполняли инфильтраци онную анестезию Ultracain DS-forte (Aventis Pharma Deutschland, Германия), вводя до 0,4 мл раствора. Хирургическое вмешательство на мягких тканях по лости рта кролика выполняли в два этапа. На первом этапе формировали дефект слизистой оболочки в об ласти шейки резца[36]. Как известно, заживление слизистой оболочки полости рта происходит в сред нем в течение 7–14 дней, поэтому мы приступали ко второму этапу вмешательства только через 14 дней после первой операции. При этом образовывалась ре цессия размерами от 2,5 до 3 мм. На втором этапе у одного резца выполняли операцию по типу методи ки коронарно-смещенного лоскута[37] с введением культивируемых клеток, заключенных в коллагеновый гель, а в области другого резца проводили контроль ное оперативное вмешательство. В зависимости от вводимого в дефект ткани материала области вмеша тельства были разделены на 6 групп.

Группа № 1 – введение фибробластов, заклю ченных в коллагеновый гель.

Группа № 2 – введение кондиционированной фибробластами культуральной среды, смешанной с коллагеновым гелем.

Группа № 3 – введение коллагенового геля без клеток.

Группа № 4 – выполнение стандартного опера тивного вмешательства по устранению рецессии десны (методика коронарно-смещаемого лоскута).

Группа № 5 – введение ММСК, заключенных в коллагеновый гель.

Группа № 6 – введение кондиционированной ММСК культуральной среды, смешанной с коллагеновым гелем.

Всего было выполнено 28 оперативных вмеша тельств: по 5 в группах № 1, 3, 4, 5 и по 4 в группах № 2 и № 6.

Для фиксации смещаемого лоскута использовали шовный материал Vicril 5/0 (D&D, Бельгия). При со хранности шовного материала его снимали во время осмотра на 7 сут. Для профилактики инфекционных осложнений по окончании операции кролику внутри мышечно вводили антибиотик Амоксициллин 15% (Invesa, Испания) из расчета 7 мг/кг массы тела. Контрольные осмотры после хирургического вме шательства проводили на 3, 7, 14, 60, 180-e сут. и через 1,5 года. Десну на стадиях заживления фото графировали в прямой и боковой проекции для ви зуального контроля результатов эксперимента. Уро вень клинического прикрепления десны измеряли с помощью стандартной методики с использованием пародонтологического зонда. Толщину новообразо ванных тканей в области шейки зуба измеряли на расстоянии 2 мм от границы десневого края с по мощью иглы и ограничителя, а затем определяли цифровое значение с помощью линейки. Величину вновь образованной ткани десны рассчитывали как разницу между высотой коронки зуба после опера тивного вмешательства и ее исходным уровнем до лечения в мм. Площадь мягких тканей, получаемую при устранении рецессии, рассчитывали в см2 с по мощью программы ImageJ, разработанной National Institutes of Health (USA) и применяемой для ана лиза и обработки изображений. Для минимизации возможной ошибки в расчетах операцию повторяли двадцать раз, а при дальнейших расчетах использо вали среднее арифметическое значение двадцати измерений. Для контроля масштаба изображения использовали размер ширины коронки зуба, являю щийся постоянной величиной. Сравнивали параме тры, полученные до начала лечения, через 14, 60 и 180 сут. после оперативного вмешательства на мягких тканях десны.

Гистологическое и иммуногистохимическое исследование. Биоптаты десны забирали на 3-и, 180-е сут. и через 1,5 года после оперативного вме шательства. Фрагменты тканей, взятые у кроликов, фиксировали в 10% растворе нейтрального форма лина в течение 24 ч, после чего материал проходил стандартную обработку в спиртах нарастающей кон центрации (70–95%), ксилоле и парафине для из готовления гистологических и иммуногистохимиче ских препаратов с толщиной серийных парафиновых срезов 5 мкм.

Для гистологического исследования срезы окра шивали гематоксилином и эозином. Иммуногистохи мическое исследование включало в себя определе ние экспрессии виментина (клон V9 RTU) (протеин, экспрессирующийся в фибробластах, клетках эн дотелия, гладкомышечных клетках, лимфоцитах) с использованием моноклональных мышиных антител (DakoCytomation). Постановка реакции проводилась непрямым трехступенчатым иммуноферментным LSAB (Labeled streptavidin – biotin, DakoCytomation, LSAB 2 System – HRP) методом визуализации; выявление пероксидазной активности осуществляли с помощью 3,3-диаминобензидина, препараты докрашивали гематоксилином Майера. Полуколичественная оценка экспрессии виментина проводилась тотально во всем срезе в областях с проявлением окрашивания от слабого до выраженного. Исследование препаратов, окрашенных иммуногистохимическим методом, проводилось при помощи светооптического микроскопа Leica DM LS. Микрофотографирование проводили при помощи цифровой фотокамеры Leica DC320.

Статистическая обработка результатов. В зависи мости от вида распределения признаков статистиче скую обработку полученных результатов проводили с использованием непараметрических и параметри ческих методов. Методы описательной статистики включали в себя оценку среднего арифметического (M), стандартной ошибки среднего значения (m), а также частоты встречаемости признаков с дискрет ными значениями. Статистическая обработка мате риала выполнялась с использованием стандаpтного пакета пpогpамм пpикладного статистического ана лиза Statistica 6.0 (StatSoft, США). Критический уровень значимости принимали равным 0,05.

Результаты

Макроскопическая характеристика регенерирующей десны

В течение первых суток после хирургического вмешательства макроскопические характеристики десны во всех экспериментальных группах не раз личались: десна была гиперемирована, прилежала к поверхности зуба за счет фиксации шовным ма териалом. На седьмые сутки после хирургическо го вмешательства десна в области вмешательства была бледно-розового цвета, определялось расши рение зубодесневой борозды, в большей степени выраженное в группах контроля. При введении куль тивируемых клеток, заключенных в коллагеновый гель, наблюдалось утолщение десны, формирующее «муфту» вокруг зуба.

На четырнадцатые сутки после хирургического вмешательства при введении в десну фибробластов, заключенных в коллагеновый гель (группа № 1), десневой край в области вмешательства был блед ный, плотный (рис. 1А). При пальпации в области введения препарата определялся участок уплотне ния мягких тканей. При визуальной оценке состоя ния мягких тканей в боковой проекции в области вве дения фибробластов, заключенных в коллагеновый гель, определялось выраженное утолщение слизи стой оболочки, отсутствующее в других группах. На четырнадцатые сутки после хирургического вмеша тельства при введении в десну ММСК, заключенных в коллагеновый гель (группа № 5), десна была блед но-розового цвета, плотно прилежала к поверхности зуба (рис. 1Б). Визуально определялась разница между состоянием десны после применения ММСК, заключенных в коллагеновый гель, и состоянием десны в группах контроля.

Через 2 мес. после хирургического вмешатель ства при введении в десну фибробластов, заклю ченных в коллагеновый гель (группа № 1), десне вой край все так же плотно прилежал к поверхности зуба, был бледно-розового цвета, но бледнее, чем цвет десны в контрольных группах (рис. 2). При пальпации десны сохранялось ощущение наличия участка уплотнения мягких тканей. При визуальной оценке состояния мягких тканей в группе № 1 в боко вой проекции, по сравнению с другими группами, вы являлось утолщение слизистой оболочки в области вмешательства. При введении в десну ММСК, за ключенных в коллагеновый гель (группа № 5), через 2 мес. после хирургического вмешательства десне вой край плотно прилежал к поверхности зуба, был бледно-розового цвета и визуально не отличался от состояния десны в группах контроля.

Через 6 мес. после хирургического вмеша тельства в группах № 1 и № 5 десневой край не отличался от такового в контрольных группах за исключением объема регенерировавшей десны. В области введении в десну фибробластов исче зал участок уплотнения слизистой оболочки, вос станавливался естественный бледно-розовый цвет десневого края.

Сравнительная оценка результатов применения различных типов клеток, заключенных в коллагено вый гель, и результатов, полученных в группах кон троля, представлены на рис. 3, 4. На рис. 4 видно, что наилучшие клинические результаты были до стигнуты при введении в десну клеток, заключенных в коллагеновый гель (группы № 1 и № 5).

Кроме того, во всех экспериментальных группах через 2 мес. после оперативного вмешательства среднее значение величины прироста новообразо ванной десны уменьшилось, по сравнению с первона чальными результатами, полученными через 14 сут. Это отражает наличие процессов реорганизации соединительной ткани в ближайшие сроки после операции. Через 6 мес. полученные через 2 мес. значения сохранились только в группах № 1, № 2 и № 5, что свидетельствует о стабильности получен ных результатов в течение данного срока наблюде ния. Через 14 сут., 2 и 6 мес. наблюдения прирост десны при введении фибробластов, заключенных в коллагеновый гель, был больше, чем при использовании ММСК.

Во всех группах через 2 мес. после оперативно го вмешательства среднее значение площади реге нерировавшей десны уменьшилось, по сравнению со значениями, полученными через 14 сут. после вмешательства (см. рис. 4). Эти данные совпадают с результатами, полученными при определении при роста регенерировавшей десны, и соответствуют из менениям объема соединительной ткани в ближай шие сроки наблюдения. Через 2 мес. после введения фибробластов в коллагеновом геле была получена большая площадь десны (S1 = 9,46±2,64 мм2), чем при введении ММСК, заключенных в коллагеновый гель (S5 = 9,02±3,12 мм2). Через 4 мес. в 1 и 5 груп пах площадь регенерировавшей десны была сопо ставима (S1 = 8,96±2,12 мм2; S5 = 9,13±2,52 мм2) и статистически значимо больше, чем в группах контроля (S4 = 4,09±2,01 мм2, p1,4;4,5 <0,02).

Гистологическое и иммуногистохимическое исследования

При гистологическом исследовании биоптатов десны, полученных на третьи сутки после введения фибробластов в коллагеновом геле, было обнаружено, что в десне присутствовал многослойный плоский эпителий с проявлениями воспалительной псевдоэпителиоматозной гиперплазии, очаговой слабо выраженной внутриэпителиальной лейкоцитарной инфильтрацией, являющейся, вероятно, реакцией на оперативное вмешательство. В базальных отделах наблюдался очаговый лакунарный некроз эпителия с образованием микрокист и слабо выраженной мононуклеарной инфильтрацией в их краях. Собственная пластинка слизистой оболочки была представлена отечной соединительной тканью с вытянутыми веретеновидными фибробластами, умеренно выраженной гистиоцитарной и выраженной лейкоцитарной инфильтрацией, немногочисленными лимфоцитами. В очагах с обнаружением геля, представленного эозинофильной субстанцией, воспалительная инфильтрация снижалась, фибробласты отсутствовали (рис. 5А). При иммуногистохимическом исследовании наблюдалась выраженная экспрессия виментина в фибробластах собственной пластинки. В то же время, в области геля выявлялась умеренно выраженная экспрессия виментина в цитоплазме гистиоцитов и отсутствие ее в фибробластах.

При гистологическом исследовании биоптатов десны, полученных на 3 сут. после введения ММСК, было обнаружено, что гистологическая картина в них сопровождалась теми же изменениями, что и в предыдущей группе, но с отсутствием в них ней трофильных лейкоцитов. Кроме того, в собственной пластинке слизистой оболочки определялись мезен химальные клетки, окруженные гелем. Наблюдались тонкостенные капилляры, что характеризовало нача ло формирования грануляционной ткани (рис. 5Б). Реакции в виде гигантских многоядерных клеток типа инородных тел в случае ММСК, заключенных в коллагеновый гель, в биоптатах обнаружено не было. При иммуногистохимическом исследовании наблюдалась выраженная экспрессия виментина в фибробластах собственной пластинки и мезенхи мальных клетках, окруженных гелем.

При гистологическом исследовании биоптатов десны, полученных через 180 сут. и через 1,5 года после введения фибробластов (рис. 6А) и ММСК (рис. 6Б), был выявлен многослойный плоский эпи телий с проявлениями очагового слабо выраженного акантоза, в собственной пластинке слизистой оболочки ткань определялось незначительное количество фибробластов, капилляров, коллагеновых волокон, а также единичные лимфоциты, что гистологически было близко к нормальному строению ткани десны. При иммуногистохимическом исследовании наблюдалась выраженная экспрессия виментина в немногочисленных фибробластах собственной пластинки и перицитах капилляров.

Обсуждение

Результаты «клинической части» исследования свидетельствуют, что в течение 2 мес. после хирурги ческого вмешательства во всех экспериментальных группах наблюдалась реорганизация соединительной ткани. Клинически это проявлялось постепенным уменьшением объема десны относительно значе ний, полученных через 14 сут. после операции. При введении в десну фибробластов (группа № 1) и ММСК (группа № 5), заключенных в коллагено вый гель, а также кондиционированных сред, сме шанных с коллагеновым гелем, через 6 мес. после операции клиническая картина стабилизировалась. При этом площадь регенерировавшей десны через 6 мес. наблюдения была больше в группе № 1, чем после введения ММСК, однако разница между эти ми значениями не была статистически значима. В контрольных группах площадь восстановившейся десны была достоверно меньше, чем в группах, в которых в десну вводились культивируемые клетки. Сравнение результатов применения фибробла стов и ММСК новорожденного кролика, заключен ных в коллагеновый гель, при устранении рецессии десны указывает на незначительно большую эф фективность применения первых. Учитывая такое важное преимущество фибробластов, по сравнению с ММСК, как возможность более простого и менее травматичного получения этих клеток у пациента, при проведении оперативного вмешательства по устранению рецессии десны следует отдать предпо чтение фибробластам кожи, заключенным в коллагеновый гель.

Макроскопическая картина восстановления дес ны после введения фибробластов и ММСК, за ключенных в коллагеновый гель, различалась. На ранних сроках заживления раны применение фибро бластов сопровождалось изменением цвета десны и появлением области уплотнения слизистой оболочки в области введения культивированных клеток.

Через 6 мес. после операции в этой эксперимен тальной группе цвет и плотность десны восстанав ливались. В то же время использование ММСК не сопровождалось изменением цвета или плотности десневого края. Мы предполагаем, что разница на этапах заживления операционной раны была связана с большей скоростью пролиферации фибробластов по сравнению с ММСК. Можно предположить, что подбор оптимальной концентрации фибробластов в клеточной суспензии, вводимой в состав коллагено вого геля, оптимизирует процесс заживления десны. Крайне важно, что результаты гистологического исследования указывали на восстановление тка ни десны путем полной репаративной регенерации в области вмешательства с применением культиви руемых клеток, заключенных в коллагеновый гель, уже через 6 мес. наблюдения.

Полученные данные указывают на большую эф фективность дополнительного введения во время обычного оперативного вмешательства культиви руемых клеток, заключенных в коллагеновый гель, по сравнению с проведением стандартного хирур гического вмешательства по устранению рецессии. В этом случае введение культивируемых клеток, за ключенных в коллагеновый гель, позволяет получить больший объем прироста десны и более стабильные результаты лечения, по сравнению с дополнитель ным введением под десну геля коллагена I типа или коллагенового геля, содержащего кондициониро ванную среду после культивирования в ней клеток. Объем регенерировавшей десны после введения культивируемых клеток, заключенных в коллагеновый гель, сохраняется в отдаленные (6 мес. и 1,5 года) сроки наблюдения. Метод введения культивируемых клеток на коллагеновом носителе прост в исполне нии, что позволяет рекомендовать его применение в сочетании с методом коронарно смещаемого лоскута для устранения рецессии десны.

Выводы

Применение фибробластов новорожденного кро лика, заключенных в коллагеновый гель, в качестве дополнения к хирургическому методу устранения ре цессии десны позволило уже через 14 сут. получить больший объем десны по сравнению с использова нием ММСК, введением коллагенового геля или стандартной операцией без дополнений, при этом объем регенерировавшей десны сохранялся в тече ние 6 мес. наблюдения. Гистологическое строение тканей десны соответствовало норме.

Разработан способ введения культивируемых клеток, заключенных в коллагеновый гель, при опе ративном вмешательстве по устранению рецессии десны.

Подняться вверх сайта