Поиск Кабинет

Сar-опосредованная антиметастатическая активность модифицированных NK-клеток линии YT

Гены & Клетки: Том XIV, №4, 2019 год, стр.: 66-71

DOI: 10.23868/201912034

 

Авторы

О.А. Коваль, В.Г. Субракова, A.A. Нуштаева, Т.Н. Беловежец, О.А. Троицкая, М.С. Ермаков, М.Е. Варламов, А.Н. Чикаев, Е.В. Кулигина, С.В. Кулемзин, А.А. Горчаков, А.В. Таранин, В.А. Рихтер

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Реферат

Адоптивный перенос T- и NK-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (CAR), рассматривают как перспективную стратегию борьбы с онкологическими заболеваниями. Химерные антигенные рецепторы представляют собой искусственные молекулы, которые обеспечивают активацию несущих их клеток при контакте с определенным антигеном для реализации функции киллинга. В отличие от Т-клеток, NKклетки не экспрессируют Т-клеточные рецепторы, что позволяет использовать их в аллогенном формате, не опасаясь реакции «трансплантат против хозяина». Целью данной работы было исследование антиметастатической активности дважды модифицированной человеческой NK-клеточной линии YT — клеток Cyto-CAR-YT-Lact, несущих CAR к белку PSMA и экспрессирующих проапоптотический белок лактаптин. Методом лентивирусной трансдукции была получена линия карциномы молочной железы BrCCh4e-134 с высокой экспрессией PSMA. В качестве эффекторных клеток была использована дважды модифицированная NK-клеточная линия человека YT — Cyto-CAR-YT-Lact, экспрессирующая функциональный CAR против PSMA и несущая делецию гена Shp-2, кодирующего белок Shp-2 — негативный регулятор активации NK-клеток. Цитотоксическую активность CytoCAR-YT-Lact-клеток in vitro оценивали на клеточной линии BrCCh4e-134 с гиперэкспрессией PSMA и на PSMAнегативной родительской клеточной линии BrCCh4e в режиме реального времени. Анализ антиметастатической активности Cyto-CAR-YT-Lact-клеток проводили на модели спонтанно метастазирующей и внутривенно трансплантированной PSMAпозитивной опухоли BrCCh4e-134 на мышах SCID и NOD/SCID. Клетки дважды модифицированной линии Cyto-CAR-YT-Lact эффективно уничтожали PSMA-позитивные опухолевые клеткимишени и с меньшей эффективностью PSMA-негативные клетки-мишени в экспериментах in vitro. В качестве опухолевой модели в работе использовали клетки рака молочной железы человека, гиперэкспрессирующие молекулы-мишени PSMA и характеризующиеся метастазированием в лимфоузлы средостения при трансплантации мышам. Было показано, что однократное внутривенное введение препарата клеток Cyto-CAR-YT-Lact супрессировало развитие метастазов на модели спонтанного метастазирования и при введении опухолевых клеток в кровоток. Ответ первичного опухолевого узла на терапию Cyto-CAR-YT-Lact-клетками не был обнаружен. Таким образом, применение модифицированных NKклеток можно рассматривать в качестве многообещающего терапевтического подхода для подавления метастазирования, но не для супрессии роста первичного опухолевого узла.

Ключевые слова: CAR-NK клетки, химерный антигенный рецептор, лактаптин, PSMA.

 

Car-dependent anti-metastatic activity of modified NK cell line YT

Adoptive T- and NK-cells transfer with chimeric antigenic receptors (CAR) is considered as a promising anticancer strategy. Chimeric antigenic receptors are artificial molecules that provide activation of the cells carrying them when they contact with a specific antigen to induce cell death. Unlike T cells, NK cells have no T-cell receptors, which prevent “graft-versus-host” disease under allograft transplantation. The aim of this work was to study antimetastatic activity of a double-modified human NK cell line YT — Cyto-CAR-YT-Lact cells carrying CAR to the PSMA protein and expressing antiapoptotic protein lactaptin. The BrCCh4e-134 breast carcinoma line with high PSMA expression was constructed by lentiviral transduction. The YT double modified NK cell line, Cyto-CAR-YT-Lact, expressing functional antiPSMA CAR and carrying a deletion of the Shp-2 gene encoding the Shp-2 protein, a negative regulator of NK cell activation, was used as effector cells. The cytotoxic activity of Cyto-CAR-YT-Lact cells was tested on PSMA-positive BrCCh4e-134 cells and on parental BrCCh4e cell in vitro in real-time mode. The antimetastasis activity of Cyto-CAR-YT-Lact cells was analyzed in SCID and NOD/SCID mice with spontaneously metastases and intravenously transplanted PSMA-positive BrCCh4e-134 cells. Cyto-CAR-YT-Lact cells efficiently reduced the viability of PSMA-positive tumor cells and moderately PSMA-negative target cells in vitro. As a tumor model, we used human breast cancer cells that overexpress PSMA as a transgene and are characterized by metastasis to the mediastinal lymph nodes being transplanted on mice. It was shown that a single intravenous administration of the Cyto-CAR-YT-Lact cells suppressed the development of metastases in the spontaneous metastasis model and when tumor cells were introduced into the bloodstream. The reaction of the primary tumor node to Cyto-CAR-YT-Lact therapy was not detected. Thus, the use of modified NK cells can be considered as a promising therapeutic approach for suppressing metastasis, but not for suppressing the growth of the primary tumor node.

Keywords: CAR-NK cells, chimeric antigene receptor, lactaptin, PSMA.

Подняться вверх сайта