Поиск Кабинет

Реакция тканей брюшины при экспериментальном повреждении на фоне применения мирамистина

Гены & Клетки: Том VIII, №1, 2013 год, стр.: 72-75

 

Авторы

Кызласов П.С., Восканян С.Э., Паклина О.В.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Изложены результаты экспериментального исследо вания, эффективности использования катионного поверх ностно активного вещества для профилактики образования спаек после внутрибрюшных операций. По данным научной литературы в связи высокой реактивностью тканей брюши ны частота развития спаечной болезнив брюшной полости не имеет тенденции к снижению; кроме биологических особенностей это обусловлено отсутствием адекватного профилактического средства и определяет необходимость поиска новых средств, обладающих свойством снижать реактивные разрастания соединительной ткани. Исследо вания проведены на 60 крысах породы Вистар. В исследу емой группе моделировалась спаечная болезнь брюшной полости, затем передушиванием лапоратомной раны про водилось внутрибрюшное введение проверхностноактивного вещества – «Мирамистин».

По данным гистологического исследования в группе животных, которым с профилактической целью вводился мирамистин, отмечалось статистически достоверное (ис следовали критерий χ2 с поправкой Йетса – для частоты спаек и критерий Манна – Уитни для выраженности спаечно го процесса) уменьшение выраженности спайкообразования.

Введение

Общепризнанно, что спаечная болезнь брюшной полости является отдельной нозологической фор мой[1, 2]. Заболевание характеризуется наличием внутрибрюшных сращений, образовавшихся в ре зультате перенесенной ранее полостной операции или травмы, воспаления органов брюшной полости и малого таза с вовлечением в процесс париетальной и (или) висцеральной брюшины[2–6]. Развитие абдоминальной хирургии предопределило значи тельное увеличение числа больных с послеопераци онными спайками. Это связано как с увеличением количества операций, так и отсутствием надежных средств и способов интраоперационной и постопера ционной профилактики спаек, в результате чего забо леваемость спаечной болезнью не имеет тенденции к снижению[10, 11]. По данным Международного спаечного общества (International Adhesion Society) по поводу спаечной болезни ежегодно в хирурги ческих отделениях лечится около 1% проопериро ванных ранее больных, у 50–75% этой категории больных развивается кишечная непроходимость, с летальностью от 13% до 55%. Разработка новых средств для предупреждения образования спаек сталкивается с рядом трудностей. Основа их заключается в противоречии между репарационным развитием соединительной ткани и необходимостью ограничивать гипертрофические процессы для предупреждения развития спаек. Представляет также затруднения оценка эффективности профилактики образования спаек после внутрибрюшных операций. В настоящее время не доказана абсолютная эффективность ни одного метода предупреждения образования спаек[3, 7, 9, 13, 14]. Консервативное лечение спаечной болезни малоэффективно[12], а после оперативных вмешательств отмечается большое количество рецидивов. Таким образом, до настоящего времени проблема спаечной болезни остается одной из самых актуальных в полостной хирургии, а наиболее перспективным направлением поиска мы считаем интраоперационную профилактику.

Поверхностно активные вещества, такие как мира мистин, обладают противовоспалительным, антибак териальным и капилляропротекторным действиями, также доказана способность мирамистина усиливать процессы регенерации и повышать местный иммуни тет[8]. Учитывая вышеуказанные эффекты, мирами стин может обладать противоспаечной активностью. Однако сведения о применении данного препарата с целью профилактики спаечного процесса в брюш ной полости отсутствуют.

Цель исследования: оценка тканевых реакций по сле повреждения брюшины в эксперименте с при менением мирамистина и без него.

Материал и методы

Эксперимент выполнен на 60 здоровых полово зрелых крысах породы Вистар, массой 160–170 г. В опытах использовали животных, прошедших ка рантинный режим вивария ФГБУ «НЦ БМТ» РАМН филиал «Столбовая» и не имевших внешних при знаков каких-либо заболеваний. Все животные со держались в одинаковых условиях, на стандартном пищевом режиме. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 16 до 18 ч, с соблюде нием принципов, изложенных в Руководстве по ла бораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских технологиях (Москва, 2010 г.) и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003).

Для получения статистически достоверных ре зультатов, все животные были разделены на две группы по 30 животных. В контрольную и опытную группу входили животные одного возраста, получен ные из питомника одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал 6,25%. Всем жи вотным проводилось оперативное вмешательство, и создавались условия для развития спаечной бо лезни брюшной полости. Спаечный процесс моде лировали асептическим травматическим способом. После срединного лапаротомного разреза выпол нялась травматизация брюшины марлевым тампо ном на зажиме типа «Москит», на площади 1×1 см. Тонкая кишка подвергалась скарификации на протя жении 4 см, отступя 0,5 см от илеоцекального угла, до появления «кровавой росы» с помощью марлево го тампона[5]. Дальнейший ход операции зависел от группы:

– группа № 1 (основная, 30 крыс): животным после травмирования висцеральной и париеталь ной брюшины в брюшную полость вводили препарат «Мирамистин» в дозе 5 мл, с последующим послой ным ушиванием раны;

– группа № 2 (контрольная, 30 крыс): животным производилось только травмирование висцеральной и париетальной брюшины, с последующим послой ным ушиванием раны.

Животные выводились из эксперимента на 14 сут. после оперативного вмешательства, что со ответствует срокам формирования внутрибрюшных спаек. Оценивалось число животных со спаечным процессом в каждой группе в целом, плотность спа ек (рыхлые или плотные), измененные органы под вергались гистологическому и иммуногистохими ческому исследованию. Гистологически оценивали толщину грануляционного вала, наличие макрофагов (использовали антитела к CD-68), количество нейтро филов и других лейкоцитов.

Для иммуногистохимического исследования (ИГХ) использовали следующий набор антител: коллаген I (клон ММН С13), разведение 1:50, Имтек (Россия); коллаген III (клонММН С33), разведение 1:50, Им тек (Россия).

Образцы тканей для ИГХ исследований фик сировали в 10% забуференном формалине (рН-7,2), подвергали стандартной гистологической обработке. Серийные парафиновые срезы толщиной 3–5 мкм наносили на стекла с адгезивным покры тием, депарафинировали по стандартному протоко лу. Выявление тканевых антигенов проводили ави дин-биотиновым методом. Интенсивность реакций оценивали полуколичественным методом (после реакции с диаминобензидином): (-/0) – отрицатель ная, (+/1) – слабая, (++/2)- средняя, (+++/3) – интенсивная. Долю соединительной ткани на срезе рассчитывали с помощью программы WCIF ImageJ, при стандартных настройках камеры и микроскопа.

Результаты и обсуждение

При макроскопическом исследовании в контроль ной группе послеоперационные спайки брюшной по лости выявлены в 80%. Они были представлены конгломератом из тонкой, слепой кишки и сальника, фиксированных к париетальной брюшине в месте травматизации последней (рис. 1).В основной груп пе спаечный процесс отмечен в 13,3% в виде фик сации тонкой кишки к послеоперационному рубцу, а в большинстве случаев зона повреждения брюшины была полностью покрыта молодой грануляционной тканью (рис. 2).

Результаты микроскопического исследования представлены в таблице. На 14 сут. после опера ции, спайки в контрольной группе встречались в 6 раз чаще,чем в основной. Они были представ лены преимущественно зрелыми межпетельными фиброзными спайками (рис. 3). Через 14 дней, в основной группе, спайки были выявлены у четырех особей в виде подпаивания тонкой кишки к после операционному рубцу и формированию межпетель ных тонких спаек с сохранением мышечных слоев обеих петель (рис. 4). При исследовании толщины грануляционного вала в контрольной группе выявле но значительное увеличение последней ~ 413 мкм, в основной группе толщина грануляционного вала составила ~40 мкм, что свидетельствует о выж женном воспалительном процессе в зоне травма тизации брюшины в контрольной группе. Также в контрольной группе нами выявлено увеличение содержания нейтрофилов и эозинофилов, что сви детельствует о склонности к лейкоцитозу и может косвенно указывать на бактериальную обсеменен ность. В основной группе нейтрофилы и эозинофилы встречались в следовых значениях.

Учитывая, что перитонеальные макрофаги явля ются основными регуляторами адгезивного процесса в брюшной полости. Начиная с 5 сут. от момента воз никновения воспалительного процесса, они сменяют нейтрофилы в патологическом очаге и привлекают фибробласты, которые отвечают за выработку кол лагеновых волокон, основного матрикса для спайки. В то же время при стихании воспалительного про цесса макрофаги способны останавливать спайкоо бразование, выделяя ряд факторов, замедляющих миграцию фибробластов и продукцию ими колла геновых волокон[13]. Учитывая вышеизложенное, нами было изучено содержание макрофагов в ос новной и контрольной группах. При исследовании содержания мы обнаружили увеличение количества макрофагов в контрольной группе и практически от сутствие в основной группе, где они были выявлены лишь в следовых значениях. Это свидетельствует о более высокой активности спаечного процесса в контрольной группе.

При изучении фибриллярных коллагенов путем иммуногистохимического исследования обнаруже но усиление экспрессии коллагена III типа (+++/3) (рис. 5) в обеих исследуемых группах, тогда как коллаген I типа определялся в следовых значени ях и не подлежал оценке. Вероятнее всего, что при начальных стадиях склеротических изменений в образующейся спайке вырабатываются коллагены III типа, являющиеся более «рыхлыми» и поддающие ся расщеплению под действием фибринолитической системы, а в ходе развития зрелой соединительной ткани происходит замещение этого типа коллагена на коллаген I типа. Учитывая отсутствие коллагенов I типа можно говорить об обратимости спаечного процесса до 14 сут. после операции.

Выводы

Образование спаек после внутрибрюшных опе раций является обратимым процессом вплоть до 14 сут.

Мирамистин существенно уменьшает частоту и выраженность спаек после внутрибрюшных опера ций и может быть использован для профилактики образования спаек после операций на органах брюш ной полости, что однако требует соответствующего клинического подтверждения.

Подняться вверх сайта