Поиск Кабинет

Остеогенный потенциал клеток из пульпы молочных зубов до и после криоконсервации: перспективы клеточного банкирования.

Гены & Клетки: Том XI, №4, 2016 год, стр.: 43-47

 

Авторы

Бухарова Т.Б., Леонов Г.Е., Галицына Е.В., Васильев А.В., Вахрушев И.В., Вихрова Е.Б., Махнач О.В., Гольдштейн Д.В.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Для эффективного применения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) из пульпы выпавших молочных зубов с целью стимулирования регенерации костной ткани необходимы данные о влиянии криоконсервации на способность этих клеток дифференцироваться в остеогенном направлении. Культуры ММСК пульпы выпавших молочных зубов были подвергнуты криоконсервации. До и после замораживания индуцировали дифференцировку клеток в остеогенном направлении в присутствии витамина D3 или дексаметазона и оценивали экспрессию остеогенных маркеров: остеокальцина, щелочной фосфатазы, BMP-2 и RunX2 – с помощью ПЦР-анализа в режиме реального времени. Минерализацию внеклеточного матрикса оценивали путем окрашивания ализариновым красным. Инкубация ММСК пульпы выпавших молочных зубов в остеогенной среде, содержащей витамин D3, приводила к повышению экспрессии маркеров остеогенной дифференцировки: остеокальцина, щелочной фосфатазы, ВМР-2 и Runх2 – и увеличению синтеза и минерализации внеклеточного матрикса как до, так и после криоконсервации. В присутствии витамина D3 экспрессия генов щелочной фосфатазы, BMP-2 и RunX2 на 14 сут. после криоконсервации была выше, чем до замораживания. Добавление витамина D3 приводило к более высокому уровню экспрессиигенов остеокальцина, BMP2 и RunX2 по сравнению с использованием дексаметазона на 14 сут. дифференцировки как до, так и после криоконсервации. Сохранение остеогенного потенциала после криоконсервации может служить необходимой предпосылкой для банкирования ММСК пульпы молочных зубов с целью дальнейшей ауто- или аллoтрансплантации.


Ключевые слова: мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки из пульпы выпавших молочных зубов, остеогенная дифференцировка, криоконсервация, банкирование стволовых клеток, витамин D3, дексаметазон.

 

Osteogenic potential of multipotent mesenchymal stromal cells from human exfoliated deciduous teeth before and after cryopreservation

The use of multipotent mesenchymal stromal cellsfrom human exfoliated deciduous teeth (SHED) to stimulate bone regeneration requires data on the influence of cryopreservation on the osteogenic differentiation capacity of these cells. SHED were subjected to cryopreservation. Before freezing and after thawing, cell cultures were exposed osteogenic differentiation with vitamin D3 or dexametasone and assessed for expression of the osteogenic markers osteocalcin, alkaline phosphatase, BMP-2 and RunX2 using real-time qPCR. Extracellular matrix (ECM) mineralization was evaluated by Alizarin red staining. Supplementation of osteogenic medium with vitamin D3 increased the expression of the osteogenic markers osteocalcin, alkaline phosphatase, BMP-2 and RunX2 as well as promoted an increase in the synthesis and mineralization of ECM in the cells both before and after cryopreservation. In the presence of vitamin D3 gene expression of alkaline phosphatase, BMP-2 and RunX2 after cryopreservation was higher than before freezing. Gene expression of osteocalcin, BMP2 RunX2 in osteogenic medium with vitamin D3was higher compared with dexamethasone for 14 days differentiation both before or after cryopreservation. The maintenance of SHED osteogenic differentiation potential after long-term cryopreservation provides a basis for banking of these cellsfor further auto- or allotransplantation.

Keywords: multipotent mesenchymal stromal cellsfrom human exfoliated deciduous teeth, osteogenic differentiation, cryopreservation, cell banking, vitamin D3, dexamethasone.

Подняться вверх сайта