Поиск Кабинет

Опыт работы Самарского регистра доноров кроветворных клеток

Гены & Клетки: Том VIII, №2, 2013 год, стр.: 75-78

 

Авторы

Тюмина О.В., Ключников Д.Ю., Волчков С.Е., Трусова Л.М.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволо вых клеток костного мозга и пуповинной крови применяет ся для лечения онкологических и иммунных заболеваний в мировой практике со второй половины прошлого века, но, несмотря на это, по-прежнему главной проблемой остается поиск совместимого донора. Для решения этой проблемы по всему миру были созданы регистры потенциальных до норов кроветворных клеток, включающие в свой состав бан ки пуповинной крови. В 2010 г. в Самаре на базе ГБУЗСО «Клинический центр клеточных технологий» был организо ван регистр потенциальных доноров кроветворных клеток. В его состав вошли единицы пуповинной крови из Самар ского банка пуповинной крови и доноры кроветворных кле ток из нескольких областей Российской Федерации. На сегодняшний день в составе регистра насчитывается более 5000 единиц пуповинной крови и 5000 потенциальных доноров кроветворных клеток. За время работы регистра из Самарского банка 44 единицы пуповинной крови были переданы в Российские и международные трансплантаци онные центры для проведения неродственных трансплан таций. По полученным результатам общая выживаемость пациентов после трансплантации кроветворных клеток пуповинной крови составила 65%. В связи с ростом он когематологических заболеваний в РФ очень остро стоит вопрос о создании единого национального регистра доно ров кроветворных клеток.

Первая успешная неродственная трансплантация костного мозга была проведена в 1973 г. в Нью Йорке ребенку, страдающему иммунодефицитом. В 1979 году была проведена первая успешная транс плантация кроветворных клеток костного мозга па циенту с острым лимфолейкозом. С тех пор прошло более 30 лет и трансплантация аллогенных гемопо этических стволовых клеток (ГСК) костного мозга и пуповинной крови стала мировой практикой[1, 2]. По данным некоммерческой организации Междуна родной сети трансплантаций костного мозга (WBMT) в 2012 г. был зафиксирован 1 миллион трансплан таций ГСК по всему миру[3]. В России количество трансплантаций ГСК не соответствует потребностям, что связано не только с недостаточностью финан сирования, но и с отсутствием возможности эф фективного поиска неродственных доноров. Нужно отметить, что, несмотря на острую потребность в донорах кроветворных клеток, в России нет единого национального регистра, в отличие от многих дру гих стран. Отсутствие законодательной регуляции деятельности регистров, невозможность в государственных учреждениях создавать отделения по набору доноров кроветворных клеток со штатными местами и бюджетным финансированием ограничивает развитие регистров в РФ. Существующие регистры либо частные, либо организованы на внебюджетные средства, и, соответственно, ведущие локальную деятельность, т.е. только в рамках своих медицинских учреждений, городов или областей. Развитие таких регистров сильно ограничено, в связи с чем среди них едва ли можно найти хоть один регистр с количеством A-B-DRB1 типированных доноров кроветворных клеток более 5000. Невысокое количество доноров, отсутствие координации между отдельными регистрами значительно снижают эффективность поиска. Несколько лучше обстоят дела с регистрами, в состав которых входят образцы пуповинной крови, увеличивая общее количество кроветворных клеток до более приемлемых цифр. С другой стороны, вопрос не только в количестве потенциальных доноров кроветворных клеток в регистрах по всей России, но и в использовании донорского материала. Возможным решением проблемы стала бы организация 2,8. единого национального регистра, который бы взял на себя функцию консолидации отдельных регистров в единую информационную сеть с целью обеспечения эффективного поиска совместимых доноров кроветворных клеток.

В 2010 г. ГБУЗ Самарской области «Клинический центр клеточных технологий» и Самарская област ная общественная организация помощи детям, стра дающим онкогематологическими заболеваниями «Виктория», учредили Некоммерческое партнерство «Регистр доноров кроветворных клеток и публичных банков пуповинной крови» (далее Регистр), который размещается на площадях Клинического центра кле точных технологий. Основная задача, которая была поставлена перед Регистром – обеспечение эффек тивного поиска совместимых доноров ГСК костного мозга и единиц пуповинной крови (ЕПК) для нужд он когематологической службы. В настоящее время Ре гистр имеет в своем составе единственный в России банк пуповинной крови, вошедший в международ ную ассоциацию банков пуповинной крови Net Cord. Регистр доноров активно сотрудничает с Покровским банком стволовых клеток (Санкт-Петербург), ГБУЗ «Оренбургская станция переливания крови» (Орен бург), благотворительным фондом «Карельский регистр неродственных доноров гемопоэтических стволовых клеток» (Петрозаводск) и многими транс плантационными центрами в России и за рубежом. Регистр входит в международную систему по поис ку доноров Bone Marrow Donors Worldwide (BMDW) и является полноправным членом всемирной ассо циации по донорству костного мозга World Marrow Donor Association (WMDA).

Материал и методы

Согласно рекомендации всемирной ассоциации по донорству костного мозга в состав Регистра входят доноры в возрасте от 18 до 50 лет, не страдающие гемотрансмиссивными, тяжелыми соматическими и психическими заболеваниями[4]. Основополага ющими принципами донорства кроветворных клеток костного мозга являются: добровольность, безвоз мездность и анонимность. Все доноры на момент вступления в регистр заполняют форму информиро ванного согласия. Сейчас Регистр включает в себя более 5000 доноров кроветворных клеток костного мозга из Самарской, Оренбургской, Саратовской, Московской областей и Карельского регистра.

Заготовка пуповинной крови проводилась в ро дильных домах г. Самары после подписания добро вольного информированного согласия беременными женщинами. Было заготовлено 10648 донорских образцов ПК и проведены исследования на нали чие следующих серологических маркеров: HIV-1 и -2Ag/Ab, Anti-HBcor, HBs-Ag, Anti-HCV, Anti-CMV, Anti-Toxoplasmagondii, Anti-HSV-1 и -2, RW. Иссле дования проводили на иммуноферментных анализа торах AxSym (Abbott, США) и Architect 1000i (Abbott, США). Бактериологические исследования осущест влялись в аккредитованной лаборатории на обору довании BACTEC™ (BD, США). Гематологические исследования проводились на гематологическом ана лизаторе Pentra 60C+ (ABX, Франция), анализ ГСК и оценка их жизнеспособности на проточном цитоф люориметре FACS Canto (BD, США). Обработка кро ви осуществлялась в чистых помещениях класса Б или ISO 5, согласно ОСТ 42-510-98 и ISO 14644-1, соответственно. Выделение клеток осуществляли двумя методами: двойным центрифугированием с гидроксиэтилкрахмалом и автоматизированным ме тодом на сепараторе клеток Sepax (Biosafe, Швей цария). Замораживание и хранение ЕПК проводи ли на автоматизированном комплексе Bioarchive® (Thermogenesis, США). Транспортировка образ цов осуществлялась в Сосуде Дьюара сухого типа Cryoshipper XC (MVE, США) согласно требованиям IATA № A152.

Определение антигенов тканевой совместимости (HLA) доноров костного мозга и ЕПК осуществля лось в аккредитованной Европейской федерацией иммуногенетики (EFI) лаборатории молекулярно генетическими методами SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) и SSP (Sequence Specific Primers) на проточном флюориметре Luminex X100 (Luminex, США).

В работе банка пуповинной крови и Регистра доно ров использованы стандарты и рекомендации следу ющих международных ассоциаций и обществ: World Marrow Donor Association (WMDA), Bone Marrow Donors Worldwide (BMDW), Net Cord, Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy (FACT), European Federation for Immunogenetics.

Результаты исследований частоты встречаемо сти HLA-типов были подвергнуты статистической обработке методами параметрической и непараме трической статистики с использованием программ Statistica 6.0 и MS Office Excel 2003. Выявленные закономерности и связи изучаемых параметров между группами и признаками были значимыми при вероятности безошибочного прогноза р = 95% и бо лее (p<0,05).

Результаты и обсуждение

По причине высокой полиморфности генов глав ного комплекса гистосовместимости существует чрезвычайно большое количество HLA-типов. На сегодняшний день по HLA-A насчитывается 1571 антиген, по HLA-B – 2156, по HLA-C – 1252, по HLADRB1 – 1030, по HLA-DQB1 – 137[5]. В нашей стране с ее богатой историей проживает более 200 национальностей[6], в связи с этим население Рос сии характеризуется очень большим разнообразием по HLA-типам. На сегодняшний день Регистр вклю чает в себя доноров многих национальностей (рис.). Соотношение мужчин/женщин составляет 49% и 51%, а средний возраст потенциального донора в Регистре составляет 32,9 лет.

Для банка пуповинной крови на основании норма тивных документов РФ и стандартов международных сообществ Net Cord и FACT нами были установлены следующие характеристики ЕПК для клинического применения: негативные маркеры на HIV-1 и -2 Ag/Ab, Anti-HBcor, HBs-Ag, Anti-HCV, Anti-CMV, Anti Toxoplasmagondii, Anti-HSV-1 и -2, RW, стерильность по отношению к гемокультурам, анаэробной флоре и грибам рода кандиды. Кроме того, чистый объём пуповинной крови до выделения ядросодержащих клеток – не менее 80 мл, количество лейкоцитов – не менее 12×108, количество живых CD34+-клеток не менее 1,6×106. Средние показатели клеточности готовых для клинического применения образцов пу повинной крови, находящихся на хранении в Самар ском банке, составляют: Le – 15,7±2,5×108, Lym – 5,0±1,5×108, CD34+-клетки – 4,9×106±2,8.

На базе Клинического центра было проведено ис следование HLA-типов образцов пуповинной крови и доноров костного мозга, по результатам которого были выявлены наиболее часто встречающиеся HLA-аллели и A-B-DRB1 гаплотипы на высоком уровне разрешения (табл. 1 и 2). Наиболее распространенные HLA-типы доноров Регистра и ЕПК Самарского банка пуповинной крови совпадают.

При обработке данных было выявлено 63 аллель ных варианта локуса А, 107 – локуса В и 100 – ло куса DRB1. Среди наиболее частых аллелей локуса А были 02:01, 03:01, 01:01; локуса B – 07:02, 18:01, 35:01; локуса DRB1 – 07:01, 15:01, 01:01. Самые распространенные гаплотипы, выявлен ные среди ЕПК Самарского банка и доноров идентич ны таковым среди северо-американской популяции доноров регистра Be The Match-USA (США)[7]. Анализ медицинской технологии, мета-анализ, рандомизированные контролируемые клинические исследования убедительно доказали более высокую клиническую эффективность метода трансплантации кроветворных клеток по сравнению с химиотерапи ей у пациентов с острыми лейкозами[8–12]. В за висимости от типа лейкоза, от возраста пациента, от группы риска 5-летняя общая выживаемость по сле трансплантации аллогенных ГСК колеблется, по данным этих исследований, от 48% до 53%, а при проведении стандартной химиотерапии – от 28% до 45%.

С 2008 года регистр передал из Самарского банка 44 единицы пуповинной крови. 8 ЕПК были переданы в иностранные трансплантационные цен тры. Возраст пациентов, получивших клеточный трансплантат, находился в пределах от 6 мес. до 69 лет. География распространения образцов включала Россию (Екатеринбург, Санкт-Петербург, Москва), Европу (Австрия, Норвегия, Дания, Польша, Велико британия, Голландия, Белоруссия) и Юго-Западную Азию (Израиль). За время работы Регистра пока не было задействовано взрослых доноров, что вероят нее всего связанно с небольшим количеством имею щихся типированных доноров, высокой сложностью синхронизации по времени процедуры сбора кровет ворных клеток у донора с началом химиотерапии ре ципиента и сложностью в транспортировке костного мозга на большие расстояния.

Заболевания, при которых проводились транс плантации ПК: острые лейкозы (11), хронический миелолейкоз (1), миелодиспластический синдром (1), лимфома (1), первичный X-сцепленный лимфопролиферативный синдром (1), первичный семейный гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз (1), первичный иммунодефицит (1) синдром Вискотта – Олдридча (1), синдром «голых» лимфоцитов (2); все пациенты – высокой группы риска.

По результатам 20 трансплантаций ЕПК прижив ление трансплантата было зарегистрировано у 18 пациентов (90%). Острая реакция «трансплантат против хозяина» (РТПХ) I-II степени развилась у 2 (10%) пациентов, случаев развития тяжелой РТПХ отмечено не было. Проявления хронической РТПХ выявлены у 1 (5%) пациента. Смертность к 100 сут. после трансплантации составила 35% (7 пациентов погибли от инфекционных осложнений). Рецидив заболевания был отмечен в 2 (10%) случаях, не приживление трансплантата – в 2 (10%) случаях. Общая выживаемость после трансплантаций пупо винной крови по оценке результатов составила 65%, с медианой наблюдения 150 сут.

Заключение

Главным источником получения ГСК является костный мозг, дополнительным – пуповинная кровь. Сегодня пуповинная кровь применяется для нужд трансплантологии ГСК в экстренных, срочных случа ях, когда время не позволяет провести дополнитель ное обследование и сбор костного мозга у взрослого донора. Поэтому очень важным является момент на личия в составе регистров неродственных доноров ГСК банков пуповинной крови.

Разнообразие HLA-типов свидетельствует в поль зу развития регистров, донорских центров и банков пуповинной крови по всей территории РФ. Много национальный состав регистра многократно увели чивает эффективность поиска донора для минорных национальностей, проживающих в Российской феде рации. На сегодняшний момент в составе Регистра имеется около 10 000 потенциальных доноров кост ного мозга и ЕПК.

Развитие донорства пуповинной крови и костного мозга в России активно движется по пути создания национального регистра.

Подняться вверх сайта