Поиск Кабинет

Комплекс низкомолекулярных ингибиторов yac увеличивает уровень экспрессии DMRT1 в клетках сертоли транзиторной зоны семенника мыши в культуре

Гены & Клетки: Том XIII, №3, 2018 год, стр.: 75-81

DOI: 10.23868/201811037

 

Авторы

А.Ю. Кулибин, Е.А. Малолина

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Реферат

В отделе семенника половозрелой мыши, содержащем транзиторную зону семенных канальцев и сеть семенника, присутствует популяция клеток, способных к активной пролиферации в культуре. Так как в этих клетках in vitro экспрессируются многие гены, специфические для клеток Сертоли, они были названы клетками Сертоли транзиторной зоны. Отличительной чертой этих клеток является пониженный уровень экспрессии Dmrt1 — транскрипционного фактора, важного для дифференцировки клеток Сертоли и поддержания развития гонады по мужскому типу. Целью настоящей работы стал поиск условий культивирования клеток Сертоли транзиторной зоны, обеспечивающих максимальную экспрессию Dmrt1, и дальнейшее тестирование функциональных свойств этих клеток. Установлено, что добавление к культуре комплекса низкомолекулярных ингибиторов YAC (Y-27632, A-83-01 и CHIR99021) значительно увеличивает долю клеток Сертоли транзиторной зоны, экспрессирующих Dmrt1. Продемонстрировано, что клетки Сертоли транзиторной зоны, культивировавшиеся в среде с YAC, сохраняют повышенный уровень Dmrt1, а при со-культивировании с клетками неонатальных семенников в 3D культуре формируют канальцеподобные структуры. По данным иммунофлуоресцентного и ПЦР РВ анализов, клетки Сертоли из культуры с YAC поддерживают развитие половых клеток в 3D культуре вплоть до стадии зиготены профазы мейоза I. Результаты работы свидетельствуют о том, что клетки Сертоли транзиторной зоны, культивирующиеся в среде с YAC, очень близки к клеткам Сертоли семенных канальцев и могут выполнять функции клеток Сертоли в условиях 3D культуры.

Ключевые слова: клетки Сертоли, транзиторная зона семенника, Dmrt1, дифференцировка половых клеток in vitro.

 

A combination of small molecular inhibitors YAC increases expression levels of DMRT1 in the culture of sertoli cells from the transitional zone of mouse testis

There is a cell population capable of active proliferation in culture in the compartment of adult mouse testis consisting of transitional zone of seminiferous tubules and rete testis. These cells were termed Sertoli cells of the transitional zone because they express many specific Sertoli cell genes in culture. A feature of these cells is a low level of Dmrt1 expression, a transcription factor important for Sertoli cell differentiation and male sex determination. In the current research, the culture conditions have been optimized to increase Dmrt1 expression in Sertoli cells of the transitional zone and then functional properties of these cells have been tested. It was shown that a combination of small molecular inhibitors YAC (Y-27632, A-83-01 and CHIR99021) substantially increases the number of Sertoli cells of the transitional zone expressing Dmrt1. It was demonstrated that Sertoli cells of the transitional zone maintained in medium with YAC remain the high level of Dmrt1 expressioneven after their transfer to 3D culture where they form seminiferous tubule-like structures with neonatal testicular cells. According to immunofluorescence and real-time PCR data Sertoli cells treated with YAC supported germ cell differentiation to the zygotene stage of meiotic prophase I in 3D culture. These results suggest that Sertoli cells of the transitional zone maintained in medium with YAC closely resemble Sertoli cells from seminiferous tubules and can function as Sertoli cells in 3D culture.

Keywords: Sertoli cells, testicular transitional zone, Dmrt1, germ cell differentiation in vitro.

Подняться вверх сайта