Поиск Кабинет

Изменение активности воспаления и выраженности фиброза у больных алкогольным циррозом печени после трансплантации аутогенных гемопоэтических стволовых клеток

Гены & Клетки: Том VII, №3, 2012 год, стр.: 34-36

 

Авторы

Бурганова Г.Р., Aбдулхаков С.Р., Гумерова А.А., Газизов И.М., Йылмаз Т.С., Титова М.А., Одинцова А.Х., Киясов А.П.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ, ЛИБО ЗАРЕГИСТРИРОВАТЬСЯ

Наиболее информативным методом оценки результатов лечения хронических заболеваний печени является морфологический анализ биоптатов. Целью исследования стало изучение эффективности трансплантации аутогенных гемопоэтических стволовых клеток в терапии алкогольного цирроза печени. Исследования проведены на биоптатах печени 11 больных алкогольным циррозом печени. Биоптаты были получены до введения аутогенных гемопоэтических стволовых клеток в чревный ствол, а также через 3 и 12 мес. после трансплантации и окрашены гематоксилин-эозином и по методу Ван Гизона. Результаты исследования показали, что через 3 и 12 мес. после трансплантации происходит улучшение структуры печени и снижение индекса гистологической активности. При анализе индекса фиброза существенной динамики показателей отмечено не было. Полученные нами данные свидетельствуют, что трансплантация аутогенных гемопоэтических стволовых клеток пациентам с алкогольным циррозом печени является достаточно эффективным методом, позволяющим снизить активность воспаления в печени и улучшить ее морфологическую структуру.

Характерной особенностью заболеваний печени, во многом затрудняющей их диагностику, является несоответствие клинических и лабораторных проявлений выраженности морфологических изменений в печени. Уровень аминотрансфераз в сыворотке мало зависит от патогистологических изменений в печени и может оставаться в пределах нормы в том числе и при циррозе печени, а также может меняться спонтанно или в ответ на различные факторы, не имеющие отношения к течению заболевания [1–3]. Инструментальные исследования также не дают достоверной информации о тяжести патологического процесса [4]. Таким образом, морфологическое исследование по-прежнему остается «золотым стандартом» диагностики воспалительных изменений и фиброза печени. Согласно существующей классификации хронических гепатитов [5], окончательный и полный диагноз должен отражать этиологию, степень активности и стадию заболевания. Морфологический анализ биоптатов печени является единственным способом, позволяющим определить активность и стадию хронического гепатита, прогнозировать течение заболевания, выявлять механизмы повреждения и контролировать эффективность лечения, в данном случае – терапии стволовыми клетками. Целью исследования было определение влияния трансплантации аутогенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) на активность воспаления и выраженность фиброза у больных алкогольным циррозом печени.

Материал и методы

Клинико-морфологические исследования были выполнены с письменного информированного согласия пациентов и в соответствии с этическими нормами Хельсинкской Декларации (2000), одобрены Ученым советом Казанского государственного медицинского университета и Этическим комитетом Министерства здравоохранения Республики Татарстан.

В клиническом исследовании участвовали 11 пациентов с алкогольным циррозом печени (класс А и В по Чайлд-Пью), которым до начала лечения проводили биопсию печени. Затем в течение 5 дней пациентам вводили препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в дозе 480 мкг, после чего получали аутогенные ГСК (в составе лейкоцитарной массы с высоким содержанием ядросодержащих мононуклеаров). Выделенные ГСК вводили в чревный ствол. Через 3 и 12 мес. после трансплантации проводили повторные биопсии печени. Парафиновые срезы биоптатов окрашивали гематоксилин-эозином, а также гематоксилинпикрофуксином по методу Ван Гизона. Полученные гистологические препараты были исследованы по протоколу, который представляет собой унифицированную балльную систему, включающую оценку гистологической активности воспалительного процесса и выраженности фиброза [6, 7] тремя независимыми морфологами, для повышения достоверности результатов оценки.

Результаты

До трансплантации аутогенных ГСК индекс гистологической активности (ИГА) колебался в пределах 10–15 баллов (в среднем – 11,7 баллов), что соответствует умеренному и тяжелому хроническому гепатиту. При сравнительном анализе через 3 мес. после трансплантации практически у всех пациентов произошло снижение ИГА (рис. 1): в числовом выражении ИГА находился в интервале 8–14 баллов (в среднем 10,6 баллов, что соответствует слабовыраженному и умеренному хроническому гепатиту).

Через 12 мес. после аутотрансплантации фракции мононуклеаров периферической крови при анализе биоптатов печени мы наблюдали увеличение разброса значений ИГА от 8 до 15 баллов (в среднем – 10,2 баллов, рис. 2). Данные диаграммы наглядно иллюстрируют снижение ИГА у больных алкогольным циррозом печени через 3 мес. после трансплантации мононуклеаров периферической крови с тенденцией к продолжающемуся более медленному снижению ИГА в течение 12 мес.

При анализе индекса фиброза (ИФ) мы наблюдали схожую картину: до трансплантации у 4 из 11 пациентов исследуемой группы был диагностирован цирроз, у 7 других пациентов – фиброз печени различной выраженности (рис. 3). Через 3 мес. после трансплантации морфологический диагноз цирроза был выставлен 2 пациентам, через 12 мес. – 3 пациентам (рис. 4). В отличие от ИГА, при анализе среднего показателя ИФ отмечалось незначительное уменьшение ИФ через 3 мес. после трансплантации и возвращение к первоначальному уровню через 12 мес.

Обсуждение

В значительном количестве работ, посвященных изучению возможности использования стволовых клеток различного происхождения в терапии пациентов с хроническими заболеваниями печени, авторы оценивали эффективность трансплантации клеток по изменению показателей шкалы Чайлд-Пью, индекса MELD и биохимических показателей [8, 9]. Однако последние, в частности, уровень аминотрасфераз, не отражают изменений гистологической структуры в печени и не имеют прогностической значимости [10].

В 2006 г. была опубликована работа [11], в которой впервые эффективность терапии хронического гепатита и цирроза печени стволовыми клетками оценивалась с использованием иммуногистохимического анализа биоптатов печени. Биопсии были выполнены до введения клеток и через 4 нед. после трансплантации клеток костного мозга. Было установлено значительное усиление пролиферации клеток и экспрессии a-фетопротеина через 4 нед. после трансплантации, что в совокупности с улучшением уровней сывороточного альбумина и общего белка, уменьшением баллов по шкале Чайлд-Пью и отсутствием побочных эффектов позволило авторам сделать вывод о перспективности данного метода в лечении декомпенсированного цирроза печени.

Учитывая необходимость морфологической оценки эффективности трансплантации на более поздних сроках после введения клеток, с одной стороны, и инвазивность манипуляции, с другой стороны, мы анализировали биоптаты печени и оценивали морфологическую картину на трех сроках: до введения аутогенных ГСК, через 3 мес. и 12 мес. после трансплантации. Впервые на этих сроках наблюдения нам удалось продемонстрировать эффект трансплантации мононуклеаров периферической крови в плане снижения активности воспалительного процесса. Отсутствие существенной динамики показателей ИФ может быть связано с тем, что пикрофуксин выявляет уже сформировавшуюся соединительную ткань, которая не исчезает после введения стволовых клеток в приносящий сосуд печени. Однако учитывая уменьшение воспалительной активности, можно предполагать, что введение аутогенных ГСК способно замедлить дальнейшее прогрессирование фиброза и накопление соединительной ткани в печени.

Полученные нами данные свидетельствуют, что трансплантация аутогенных ГСК в чревный ствол пациентам с алкогольным циррозом печени является безопасным и достаточно эффективным методом, позволяющим снизить активность воспаления в печени, улучшить ее морфологическую структуру, и, как следствие, отсрочить прогрессирование фиброза.

Подняться вверх сайта