Поиск Кабинет

Использование методов редактирования генома для создания изогенных клеточных линий, моделирующих болезнь Хантингтона in vitro

Гены & Клетки: Том XI, №2, 2016 год, стр.: 106-113

 

Авторы

Малахова А.А., Сорокин М.А., Сорокина А.Е., Маланханова Т.Б., Мазурок Н.А., Медведев С.П., Закиян С.М.

ДЛЯ ТОГО ЧТОБЫ СКАЧАТЬ СТАТЬЮ В ФОРМАТЕ PDF ВАМ НЕОБХОДИМО АВТОРИЗОВАТЬСЯ

Реферат

Болезнь Хантингтона – это аутосомно-доминантное нейродегенеративное заболевание, обусловленное мутацией экспансии тринуклеотидных повторов в первом экзоне гена НТТ. Нейродегенеративные расстройства с трудом поддаются изучению из-за ограниченной доступности материала и позднего начала клинического проявления, поэтому клеточные модели in vitro предоставляют хорошую возможность для изучения молекулярных механизмов развития патологии. Новые подходы редактирования генома позволяют получать клеточные линии, которые могут служить в качестве моделей наследственных заболеваний, и дают возможность получения изогенных пар клеточных линий, которые обеспечат адекватный контроль для исследований.

В работе представлен метод введения в геном культивируемых клеток динамической мутации экспансии повтора CAG с помощью гомологичной рекомбинации. Для повышения частоты рекомбинационных событий использовали систему CRISPR/Cas9, позволяющую направленно и специфично вносить двуцепочечные разрывы ДНК в геном клеток. Сконструирована донорная молекула, несущая 215 тринуклеотидных повторов CAG, фланкированных длинными плечами гомологии к первому экзону гена НТТ, которая служила матрицей для гомологичной рекомбинации.

Эффективность метода была проверена на клеточной линии HEK293 Phoenix. Получены клоны клеток, несущие как встройки тринуклеотидных повторов CAG в гене НТТ (55-215 триплетов), так и делеции протяженных участков первого экзона НТТ (до 561 п.н.). Показано, что наличие мутации в геноме клеток линии НЕК293 Phoenix влияет на их жизнеспособность и скорость пролиферации.

Подняться вверх сайта